油桃花芽休眠诱导期PpFAR1/PpFHY3的表达分析及PpABI5上游调控因子的筛选

作     者：郇蕾 

作者单位：山东农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：高东升

授予年度：2017年

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090201[农学-果树学] 

主      题：油桃花芽 休眠诱导 FHY3/FAR1 ABI5 表达分析 酵母单杂交 

摘      要：光信号和植物激素ABA是诱导休眠的重要因子,FAR-RED ELONGATED HYPOCOTYL 3(FHY3)和它的同源基因FAR-RED-IMPAIREDRESPONSE 1(FAR1)是phyA信号途径中重要的正调控因子,参与远红光、ABA对拟南芥种子休眠的调节,然而FHY3/FAR1在木本植物花芽休眠中的表达尚不清楚;ABI5是ABA信号响应的关键基因,研究调控ABI5基因表达的转录因子对进一步阐述ABA信号转导及调控具有重要意义。本研究以‘中油四号’油桃花芽为材料,根据NCBI中拟南芥FAR1/FHY3登陆的基因,在拟南芥基因组数据库中查得FAR1/FHY3的蛋白序列,与已建立的桃全基因组氨基酸序列进行Blast序列比对,初步筛选出同源氨基酸序列的候选基因,将这些基因通过Pfam进行分析,去除无FAR1/FHY3保守结构域的基因序列;测定了5个同源基因在休眠诱导期的表达,并在休眠诱导期分别用ABA及远红光处理桃树,荧光定量检测了基因的表达量变化;以PpABI5启动子序列为诱饵,转化酵母细胞构建诱饵载体,构建桃花芽酵母单杂交cDNA文库,经同源重组筛选PpABI5启动子的上游转录调节因子。主要研究结果如下:1.桃中FAR1/FHY3的同源基因Prupe.3G186100、Prupe.3G186200、Prupe.4G115100、Prupe.3G186000在休眠诱导期均有上调,且受ABA诱导表达上调,受远红光诱导表达下调,而Prupe.2G327900在休眠诱导期表达下调,受ABA诱导下调,受远红光诱导上调。说明PpFRSs基因可能通过不同的模式参与ABA和远红光对油桃花芽休眠诱导的调控。2.构建的cDNA文库库容为1×107 CFU,插入片断长度平均在1500bp左右。酵母单杂筛选结果经测序和Blast同源性分析,获得PpDAM3和PpDAM5 2个与桃休眠相关的转录因子。通过互作验证进一步证实PpDAM3和PpDAM5与PpABI5存在潜在的结合关系,说明PpDAM3和PpDAM5可能通过与PpABI5互作参与ABA信号途径进而调控桃的休眠。