人类未知功能蛋白质的克隆、表达、纯化和结晶

作     者：韩振坤 

作者单位：东北师范大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陆军;郑晓峰

授予年度：2009年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主      题：结构基因组学 表达 可溶性鉴定 纯化 晶体生长 

摘      要：随着人类结构基因组计划的完成,基因产物的功能更加受人关注。通过大规模高通量的未知结构蛋白质的晶体筛选、结构解析来阐述其生物学功能和意义成为了当前研究蛋白质功能的一个主要手段。 我们选择了100个人类基因作为靶基因,这些蛋白质分子量在20到50 kDa之间,没有已知的晶体结构和作为同多聚体亚单位的结构,含有较少的疏水残基。我们希望通过对所挑选的靶蛋白的晶体来确定其结构,以此来解释其功能和生物学意义。通过GatewayTM技术我们成功地克隆了这100个基因,其中有79个基因在*** BL21(DE3)中表达,有9个基因在*** Rosetta(DE3)中表达。通过可溶性鉴定,发现有21个蛋白质具有可溶性。我们使用Ni亲和层析和凝胶过滤等方法得到了12个具有高纯度的目的蛋白质,并利用坐滴法将已纯化的蛋白质放在48孔坐滴板上进行蛋白质晶体生长条件的筛选,然后使用悬滴法进一步优化晶体生长条件。目前获得了COQ3蛋白质晶体。这些工作为进一步研究这些蛋白质的结构和功能奠定了良好的基础。