胰瘅贴治疗重症急性胰腺炎模型大鼠TLR4/NF-KB信号机制研究

作     者：康晓征 

作者单位：泸州医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：肖国辉

授予年度：2011年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：胰瘅贴 重症急性胰腺炎 TLR4/NF-κB 

摘      要：目的：观察胰瘅贴治疗重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)大鼠治疗后不同时间点血清淀粉酶(AMY)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平的变化；观察胰腺组织大体形态和光镜下改变、Toll样受体4(Toll like receptor 4, TLR4)和核因子-KB (NF-KB)表达的变化以探讨胰瘅贴外敷综合治疗在SAP大鼠胰腺细胞炎症信号转导通路中的效应机制。方法:wistar大鼠120只,雌雄各半,体重约220-260g,随机分为假手术组(J组)、模型组(M组)、善宁治疗组(S组)、胰瘅贴组(Y组)、善宁胰瘅贴组(Z组)。J组采取开腹翻动腹腔脏器数次后,使用一次性注射针头在胆胰管开口处的十二指肠对侧壁穿刺进入胆胰管开口进入约1.0cm,不注射牛磺胆酸钠即关腹；M组用0.5%的牛磺胆酸钠按1.0ml/kg逆行胰胆管注射诱发SAP；S组造模前半小时用善宁50 ug/kg于皮下注射；Y组造模成功后用胰瘅贴外敷于大鼠上腹部,每天换药一次,7次为一疗程；Z组造模前半小时用善宁50ug/kg于皮下注射,造模后用胰瘅贴外敷于大鼠上腹部,每天换药一次,7次为一疗程；分别于3h、12h、72h、2W[1-3]时间点.每组各处死6只大鼠,光镜下观察胰腺组织病理改变,同时测定大鼠血清AMY；用ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β的含量,用免疫组织化学法检测TLR4和NF-ΚB的蛋白表达。所有结果均用SPSS 16.0软件分析,行方差分析。结果：1.胰腺组织形态变化及组织病理评分：①J组各时间点胰腺组织形态均未见明显异常。M组各时间点胰腺小叶间弥慢性水肿、炎性细胞浸润均明显,随着时间的推移,炎症逐渐扩展至腺管边缘,胰腺实质炎症50%,核仁胞浆成分着色不清楚,胰腺实质性出血50%,腺管点状坏死灶、小叶缺失,12h时最明显；S组、Y组胰腺小叶间弥慢性性水肿、炎性细胞浸润均明显,胰腺实质炎症50%,实质性出血50%,腺管点状坏死灶、小叶缺失,随着时间的推移,胰腺小叶间弥漫性水肿、实质性炎症、出血、坏死程度减轻；Z组3h时胰腺小叶间弥慢性性水肿、胰腺实质性炎性细胞浸润均明显,实质炎症50%,实质性出血50%,腺管点状坏死灶、小叶缺失均明显,随着时间的推移,胰腺小叶间弥漫性水肿、炎症、出血、坏死程度明显减轻。②各组胰腺组织的病理学评分：J组的病理学评分值各时间点均无明显差异(P0.05)。M组、S组、Y组与Z组各时间点的病理学评分值均明显高于J组(P0.01),随着时间的推移,M组、S组、Y组与Z组的评分值逐渐上升,12h时达高峰；Z组各时间点的评分值明显低于M组、S组、Y组(P0.01)。*** (U/L):J组大鼠血清AMY水平很低。造模后3h,M组、S组、Y组、Z组大鼠血清AMY均开始升高,随时间延长逐渐升高,12h时仍处于高峰,72h后渐降低,2W最低。Z组AMY改变与M组、S组、Y组基本相同,但各时间点AMY数值均比M组、S组、Y组降低(P0.01)。***-α(pg/m1)：M组、S组、Y组、Z组与J组相比血清TNF-α均明显升高(P0.01),且随时间延长逐渐升高；Z组血清TNF-α低于M组、S组、Y组。(P0.05或P0.01)。***-1β(pg/m1)：M组、S组、Y组、Z组血清IL-1β均明显高于J组(P0.01),且随时间延长逐渐升高；Z组血清IL-1β低于M组、S组、Y组(P0.01)。5.胰腺组织TLR4蛋白表达：免疫组织化学结果显示：M组、S组、Y组、Z组TLR4蛋白表达随时间延长而增强,以IOD表示,J组TLR4蛋白活性很低。造模成功后3h内TLR4蛋白迅速被激活,在12h处于高峰,72h后降低至正常水平。Z组TLR4蛋白活性变化规律与M组、S组、Y组大致相同,但各时间点活性均比M组、S组、Y组明显降低(P0.01)。6.胰腺组织NF-K B蛋白表达：J组NF-K B活性很低。造模成功后,M组、S组、Y组、Z组在3h内NF-K B迅速被激活,在3h处于高峰,12h仍处于高峰,72h后渐降低,2W最低。Z组NF-ΚB活性变化规律与M组、S组、Y组基本相同,但各时间点活性低于M组、S组、Y组(P0.01)。上述结果表明,胰瘅贴治疗SAP大鼠,能明显减轻胰腺小叶间弥漫性水肿、炎症,胰腺实质性出血、腺管点状坏死灶、小叶缺失；各时间点的病理评分值,Z组明显低于M组、S组、Y组；血清AMY数值、TNF-α、IL-1β,Z组低于M组、S组、Y组；Z组胰腺组织中TLR4和NF-ΚB蛋白表达活性低于M组、S组、Y组。结论：胰瘅贴治疗SAP疗效优于单纯善宁治疗；胰瘅贴治疗SAP大鼠的可能机制：其降低TLR4表达,从而抑制TLR4对炎症