植物乳杆菌对IL-10基因敲除结肠炎小鼠黏附分子的影响

作     者：储昭新 

作者单位：苏州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：秦环龙

授予年度：2010年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：益生菌 植物乳杆菌 炎症性肠病 IL-10基因敲除 淋巴细胞归巢 

摘      要：目的:观察植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum,LP）灌胃对IL-10基因敲除小鼠肠道炎症和淋巴细胞归巢的影响。 方法: 20只IL-10基因敲除（knockout, KO）小鼠和20只未作基因敲除的背景鼠随机分为4组:对照组（野生组WT）、野生加植物乳杆菌组（WT+LP）、IL-10基因敲除模型组（KO）、模型加植物乳杆菌组（KO+LP）,所有小鼠均饲养无特殊病原微生物（Specific pathogen-free, SPF）条件下。从4周龄始WT和KO组每日予PBS灌胃,WT+LP和KO+LP组予溶于PBS的LP （109CFU/ml）灌胃,持续4-8周结束。试验结束后取各组小鼠结肠行炎症评分和电镜亚显微结构观察,并作免疫组化检测黏膜地址素细胞黏附分子-1（Mucosal addressin cell adhesion molecule-1,MAdCAM-1）和细胞间粘附分子-1（Intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1）的表达水平。ELISA试剂盒检测各组小鼠结肠促炎细胞因子TNF-α和IFN-γ表达水平,分别用RT-PCR和western blot检测归巢相关分子MAdCAM-1、ICAM-1、α4β7及CD3的mRNA和蛋白表达水平。 结果:4周龄的KO小鼠均出现结肠炎症,8周龄时炎症达高峰。LP能降低KO小鼠的炎症评分,并能下调MAdCAM-1和ICAM-1的表达,但不能显著抑制TNF-α和IFN-γ表达水平。KO组小鼠CD3及黏附分子α4β7、ICAM-1和MAdCAM-1的mRNA和蛋白表达水平较WT组均明显增高（mRNA:依次t=39.42;8.83;25.53;45.78,均p0.01;CD3及黏附分子ICAM-1和MAdCAM-1的蛋白表达水平:依次t=19.04;29.57;12.29,均p0.01）。予以益生菌LP灌胃后,KO+LP组小鼠CD3及黏附分子α4β7、ICAM-1和MAdCAM-1的mRNA和蛋白表达水平较KO组均明显降低（mRNA:依次t=20.34;4.95;14.21;22.31,均p0.01;CD3及黏附分子ICAM-1和MAdCAM-1的蛋白表达水平:依次t =6.82;14.10;7.03,均p0.01）;WT+LP组小鼠CD3及黏附分子α4β7、ICAM-1和MAdCAM-1的mRNA较WT组均明显降低（依次t =9.33;10.55;7.75;6.69,均p0.01）,而WT+LP组小鼠CD3及黏附分子ICAM-1和MAdCAM-1的蛋白表达水平较WT组无明显降低。 结论: IL-10基因敲除小鼠在SPF条件下能发生结肠炎症。植物乳杆菌能下调IL-10基因敲除结肠炎小鼠粘附分子的高表达,这可能是其减轻炎症状态,缓解炎症性肠病的重要机制之一。