Dp71在胃癌中的表达及其生物学意义研究

作     者：曹晓霞 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：谭斯品

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：Dp71 胃癌 生物学意义 

摘      要：肌营养不良蛋白Dystrophin是导致杜氏肌营养不良症（Duchenne muscular dystrophy, DMD）的致病基因,该基因在不同的组织中和不同的组织特异性启动子结合,可以产生不同的剪切本。DystrophinDp71是其表达最广泛的一个剪切本。通过和其他一些蛋白形成蛋白复合物,Dp71在各个不同的组织起着支撑和信号传递的作用。相关文献报道Dp71介导的细胞的分化、增殖、黏附。改变Dp71的表达可以引起PC12细胞的细胞周期发生改变。作为一种可以参与细胞分裂周期的蛋白,本课题检测Dp71mRNA和蛋白在胃癌组织和癌旁组织,正常人胃上皮细胞（GES-1）和胃癌细胞系（AGS, SGC-7901和BGC-823）中的表达,分析其表达差异是否具有统计学意义;消减Dp71蛋白在正常胃粘膜细胞GES-1中的表达,提高Dp71在胃癌细胞系SGC-7901中的表达,并检测细胞的活力与增殖能力,初步探讨Dp71在胃癌中表达改变的生物学意义。 实验方法：（1）采用实时荧光定量PCR, western blotting、免疫组织化学技术检测Dp71在胃癌组织及癌旁组织,人胃粘膜上皮细胞及三种胃癌细胞系中的表达水平（2）PCR、酶切及连接反应构建Dp71的RNA干扰质粒,酶切、测序验证质粒构建是否成功,western blotting检测构建的RNA干扰质粒对于人胃粘膜上皮细胞Dp71蛋白的消减效率（3）采用cck8法检测转染了Dp71的RNA干扰质粒人胃粘膜上皮细胞,转染了Dp71真核表达质粒的SGC-7901细胞的活力与增殖能力。探讨Dp71的可能抑癌机制。 实验结果：（1） Real-time PCR, western blot和免疫组织化学和结果显示：Dp71在胃癌组织的表达明显低于癌旁组织。免疫组化结果表明：Dp71蛋白表达改变与胃癌的分化程度和淋巴结转移相关（P0.05）,而与性别,年龄,浸润深度,TNM分期,远处转移及肿瘤大小无关。（2）和人胃粘膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞株AGS, SGC-7901, BGC-823的Dp71的]mRNA和蛋白表达降低。（3）成功构建Dp71的RNA干扰质粒,于人胃粘膜上皮细胞（GES-1）中转染Dp71干扰质粒,检测细胞增殖能力改变,发现干扰Dp71后,细胞增殖活力没有改变。（4）胃癌细胞SGC-7901转染Dp71真核表达质粒Dp71f, Dp71d,和转染空白质粒和空白SGC-7901细胞株相比,在48小时,72小时呈现出增殖能力下降。