宁波北仑地区急性腹泻患者副溶血弧菌表型及分子特征研究

作     者：谢红意 

作者单位：浙江大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈瑜

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：急性腹泻 副溶血弧菌 血清型 毒力基因 多位点序列分型 

摘      要：目的： 副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus, VP)是一种革兰阴性嗜盐性弧菌,广泛存在于海水和海产品中。1950年在日本副溶血弧菌首次发现并被认为是引起食物中毒的重要致病菌,在我国,副溶血弧菌感染引发的暴发事件居微生物食源性疾病爆发的首位。浙江宁波位于我国东南沿海,海产品消费比较盛行,人们又喜欢食用生的或者未煮熟的海产品,因此副溶血弧菌是引起食物中毒最主要的病原菌。本课题通过收集宁波北仑区急性腹泻患者粪便标本,通过检测血清学凝集试验,可以知道宁波北仑区溶血弧菌血清型构成谱;通过毒力基因检测及分子分型分析,可以为副溶血弧菌感染的防控提供分子流行病学依据,这为开展副溶血弧菌的持续监测研究提供依据,并为进一步的研究工作奠定基础。 方法： 2012年4月至2012年10月,从北仑区人民医院采集急性腹泻患者的粪便标本,用常规微生物检验程序对常见肠道致病菌进行分离培养及鉴定。对分离的副溶血弧菌菌株开展血清学凝集试验、利用PCR技术检测毒力基因检测及多位点序列分型(MLST)分析。 结果： 1.2012年4-10月共收集腹泻患者的粪便共962份,共分离出副溶血弧菌71株,分离率为7.4%(71/962),列细菌性病原第二位。感染病例男女性别比为1.73:1(45例：26例),年龄范围为16-61岁,其中主要集中在20-45岁(69.0%,49/71)。 2.本次研究共有16种O、K血清型组合,其中03:K6型是最主要的血清型,共44株,占62.0%;04:K8(5株,7.0%)、O1:K56(3株,4.2%),另有3(4.2%)株未鉴定出O、K型别,归类于OUT:KUT型。 3.利用PCR对71株副溶血弧菌进行***毒力基因检测发现：所有副溶血弧菌tlh基因均阳性,98.6%的菌株(70株)tdh基因阳性,仅3株为trh阳性。基因型表现为：tlh+tdh+trh-菌株67株,tlh+tdh+trh+菌株3株和tlh+tdh-trh-菌株1株。通过对大流行群菌株遗传标志性基因的检测发现,宁波北仑区急性腹泻患者感染的副溶血弧菌主要是大流行菌株(tdh+,trh-和toxRS/new+),共47株(66.2%);非大流行菌株共24株(33.8%)。36株大流行菌株携带orf8基因,占所有大流行菌株的76.6%。 4.在本次研究中,71株急性腹泻患者分离的副溶血弧菌进行副溶血弧菌MLST分析,全部成功分型,共分为13个STs,其中ST3共45株(63.4%),ST885株,ST479、ST8和ST120各4株,另外还包括ST176、ST199、ST216、ST332、ST417、 ST610、ST712和ST80等8种STs。 结论： 1.本地区急性腹泻患者中副溶血弧菌检出率高达7.4%,因此在本地区腹泻病例中有必要开展副溶血弧菌的检测,降低副溶血性弧菌引起的食源性疾病的发生和传播的有效途径。 ***是宁波北仑地区副溶血弧菌最主要的致病因子,大流行株是本地区最主要的流行株,血清型03:K6的副溶血弧菌是其优势菌株。 3.通过MLST分型发现宁波北仑区急性腹泻患者中副溶血弧菌ST3最多,是优势型别。主要优势型别与世界上许多国家流行的型别一致,但同时又存在多种亚型。副溶血弧菌流行亚型的多样性是其在宁波北仑区呈高发流行的一个主要原因。