羧甲基葡聚糖修饰阿霉素脂质体的制备及其性能研究

作     者：宁顺花 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张翼;刘又年

授予年度：2011年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 10[医学] 

主      题：脂质体 羧甲基葡聚糖 阿霉素 稳定性 靶向性 

摘      要：脂质体具有生物相容性、缓释性、靶向性、保护被包封的药物等优点,因而广泛应用于药物递送。但由于普通脂质体（UC-LIPs）存在体内外稳定性差、不易储存、容易团聚、包封的药物易渗漏等缺点,限制了其广泛应用。因此,对脂质体的表面进行修饰为解决上述问题提供了一种强有力的手段。葡聚糖是一种无毒、无免疫原性、生物相容性、可生物降解的天然高分子聚合物,在药物制剂领域有着广泛的应用。本文主要是利用葡聚糖衍生物对脂质体表面进行修饰,制备了具有很好稳定性和药物缓释性能的脂质体。 首先以葡聚糖为原料,合成了羧甲基葡聚糖（carboxymethyl dextran,简称CMD）,然后CMD与油胺共价结合得到两亲性CMD。采用红外光谱和核磁共振氢谱对合成产物进行结构表征,同时对羧甲基取代度和油胺取代度进行了测定。本文选用的两亲性CMD,羧基取代度为0.3,油胺取代度为0.1。 其次,以大豆卵磷脂、胆固醇、两亲性CMD为膜材,通过薄膜超声法制备羧甲基葡聚糖修饰脂质体（CMD-LIPs）,并用原子力显微镜（AFM）和激光粒度-Zeta电位仪对其物化性质进行表征。实验结果表明,CMD-LIPs的表面电荷为-30 mV,粒径约为100 nm,4℃下储存期可达6个月以上,可以冻干保存,冻干再分散性好,且在血清中不解离不团聚。此外,采用表面等离子体激元共振技术（SPR）分别研究了UC-LIPs、CMD-LIPs和偶联anti-BSA的CMD-LIPs （anti-BSA attached CMD-LIPs）三种脂质体对牛血清白蛋白（BSA）的吸附。结果表明,CMD-LIPs对BSA的吸附量很少,表明该脂质体在血液中具有潜在的长循环性质;anti-BSA attached CMD-LIPs能够与BSA特异性结合,说明CMD-LIPs上的羧基进一步与配体反应制备的靶向脂质体,具有主动靶向作用。 最后,采用硫酸铵梯度法制备了CMD修饰阿霉素脂质体,并对其结构、粒径、ζ-电位、稳定性、包封率、药物释放和细胞毒性等性能进行了研究。结果表明,与普通阿霉素脂质体相比,CMD修饰阿霉素脂质体的稳定性很好,在血清中不解离不团聚,且冻干样品能再分散。相对于普通脂质体,CMD修饰阿霉素脂质体体外释放具有很好的缓释作用和明显的pH敏感性。CMD修饰阿霉素脂质体在pH为5.0的HAc-NaAc缓冲液中释放速度及累积释放百分率明显高于pH7.4的环境中,这样有利于脂质体在肿瘤酸性pH下快速释放,降低对正常组织的毒副作用。细胞毒性试验表明,阿霉素脂质体对Hela细胞生长具有明显的体外抑制作用,且具有时间和浓度依赖性。同时,CMD-LIPs还适合用作其它多种药物、营养物质、香料、染料的载体。