斑马鱼（Danio rerio）甘露糖结合凝集素母源性免疫功能

作     者：卜令真 

作者单位：中国海洋大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张士璀

授予年度：2013年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主      题：斑马鱼 甘露糖结合凝集素 母源性免疫 补体 

摘      要：补体系统（complement system)是先天性免疫系统的非常重要的组成部分，补体系统的激活有三条主要的途径：经典途径（classical pathway)、替代途径（alternativepathway)和凝集素途径（lectinpathway)。其中，凝集素途径被认为有可能是补体激活途径中比较古老的一条途径，因为己经发现无脊椎动物中存在甘露糖结合凝集素（mannose-binding lectin，MBL)和甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MBL-associated serine proteases, MASPs)。MBL是一种模式识别分子，可以与甘露糖结合以及调理带甘露糖的病原体，激活补体系统。 本文采用mannan-agarose亲和层析的方法从斑马鱼4?8细胞的胚胎中纯化出了甘露糖结合凝集素，并对其功能进行了初步探索。细菌结合实验表明，从胚胎中纯化的MBL能与革兰氏阴性菌大肠杆菌〈Escherichiacoli)和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌、Staphylococcus aureus)结合。促吞唆实验发现，纯化出的斑马鱼MBL能促进鲤鱼巨唆细胞对大肠杆菌、***)和金黄色葡萄球菌、***)的吞唆作用。胚胎勻楽能够促进鲤鱼巨唆细胞对大肠杆菌、***)和金黄色葡萄球菌、***、的吞噬作用，而向胚胎匀浆中加入MBL抗体后，胚胎匀浆的促吞噬作用减弱。显微注射实验表明：向胚胎中注射MBL抗体后，胚胎在受到斑马鱼的主要致病菌嗜水气单胞菌LAeromonas hydrophila)感染时死亡率显著升高;向胚胎中注射纯化的MBL后，胚胎对嗜水气单胞菌的抵抗能力增强;同时注射MBL和MBL抗体时，这种作用被显著地抑制。这说明MBL对发育中的胚胎具有保护作用。最后，本文采用免疫印迹（Westenr-blot)的方法证明斑马鱼胚胎中存在MASP。这些结果说明，斑马鱼中MBL参与早期胚胎免疫保护作用，它可能通过凝集素途径发挥作用。