Btk及NFκB抑制剂对急淋小鼠疾病转归的影响及其作用机制的探讨

作     者：张欣 

作者单位：南京医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：于亮

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：急性B淋巴细胞白血病(B-ALL) Btk NFκB PCI-32765 Bortezomib Ara-c B-ALL-NOD/SCID小鼠 

摘      要：目的:通过观察Btk及NFκB抑制剂对急性B淋巴细胞白血病-NOD/SCID(BALL-NOD/SCID)模型小鼠疾病转归及生存期的影响,研究其可能的作用机制,探讨Btk及NFκB抑制剂靶向治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)的可行性及临床意义。方法:1.B-ALL-NOD/SCID小鼠模型的构建:4周龄NOD/SCID小鼠尾静脉注射5×106个Nalm-6细胞(0.2ml),无菌层流柜中饲养。观察小鼠白血病发病情况;利用流式细胞术检测NOD/SCID小鼠移植Nalm-6细胞后外周血中CD10+CD19+细胞占有核细胞的比例。***-32765、Bortezomib和Ara-c对B-ALL-NOD/SCID模型小鼠疾病转归的影响及其机制:将小鼠随机分为:空白组(未建模组)、B-ALL-NOD/SCID模型小鼠又分为:对照组(未加药组)、单药组(PCI-32765、Bortezomib、Arac)、两药联用组(PCI-32765及Bortezomib)及三药联用组(PCI-32765、Bortezomib及Ara-c),于不同时间点(3天、7天、15天)加药,无菌层流柜中饲养,观察小鼠白血病发病情况、生存期、脾脏大小、重量变化及病理形态改变。于小鼠濒死前或死亡后即行解剖,留取骨髓细胞,瑞氏染色观察有无异常的白血病细胞;脾脏常规病理切片,观察异常白血病细胞在脾脏中的浸润情况;Western Blot检测各组脾脏细胞Btk、NFκB、凋亡蛋白caspase-3、抗凋亡蛋白BCL-XL、CIAP-1表达的变化。免疫组化检测脾脏细胞Btk、NFκB蛋白的表达。结果:1.成功构建B-ALL-NOD/SCID模型小鼠:1.1 NOD/SCID小鼠移植后7天,流式细胞术检测外周血中CD10+CD19+细胞占有核细胞细胞的比例大于1%,提示小鼠生物学发病。1.2 NOD/SCID小鼠移植后15天,开始出现食欲减退,后肢瘫痪,弓背抬高等症状,提示临床发病。1.3白血病小鼠的平均生存期:(18.40±0.89)天。***、PCI-32765和Ara-c对B-ALL-NOD/SCID小鼠疾病转归的影响及其机制:2.1 NOD/SCID小鼠移植Nalm-6细胞3天后,单药应用Bortezomib(1mg/kg)、PCI-32765(12.5mg/kg)、Ara-c(10mg/kg),各组小鼠生存期分别为(22.70±0.37天)、(22.30±0.52天)、(21.33±0.67天),Bortezomib和PCI-32765两药联用组生存期为(28.00±0.60天),Bortezomib、PCI-32765和Ara-c三药联用组生存期为(31.50±1.23天),与对照组小鼠生存期(18.67±0.42天)相比,生存期均显著延长(p0.05)。2.2 NOD/SCID小鼠移植Nalm-6细胞7天后,单药应用Bortezomib、PCI-32765小鼠生存期分别为(21.83±0.70天)、(21.67±0.42天),Bortezomib和PCI-32765两药联用组生存期为(24.17±0.80天),与对照组小鼠生存期(18.40±0.40天)相比,生存期均显著延长(p0.05)。2.3 NOD/SCID小鼠移植Nalm-6细胞15天后,单药应用Bortezomib、PCI-32765后B-ALL-NOD/SCID小鼠的生存期比对照组有所延长,但并无统计学差异;单用Ara-c及联用Bortezomib、PCI-32765和Ara-c生存期分别为(21.83±0.48天)、(23.67±0.71天),明显高于对照组(18.40±0.40天)及单药组(p0.05)。2.4单药及联合应用Bortezomib和PCI-32765,均可降低小鼠脾脏细胞Btk及NFΚB的表达,病理组织各组免疫组化平均累积光密度值(IOD)分别为Btk:(73890.18±1911.34、74300.38±1516.14,36039.81±2894.98)vs对照组(120348.30±9881.02),(p0.05),NFκB:(73379.62±2121.27,74184.62±2208.24,33857.30±2789.34)vs对照组(109770.90±6849.65),(p0.05).Western Blot检测示单药及联合用药组Btk、NFκB及BCL-XL、CIAP-1表达水平下降(p0.05),caspase-3表达水平升高,两药联用作用更加明显(p0.01)。结论:1.利用4周雌性NOD/SCID小鼠尾静脉注射5×106个Nalm-6细胞可成功建立B-ALL-NOD/SCID小鼠模型,生物学发病时间为7天,临床发病时间为15天。