中国林蛙卵巢的组织学及免疫细胞化学研究

作     者：蒋一淼 

作者单位：陕西师范大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张育辉

授予年度：2004年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071002[理学-动物学] 

主      题：中国林蛙 卵泡发育 类固醇激素 类固醇激素受体 c-myc c-fos c-myb 

摘      要：在卵泡的生长发育过程中，性类固醇激素及其受体有很重要的调控作用，原癌基因的表达也与卵子发生有着密切的关系。本研究选用中国林蛙为材料，运用组织学方法观察和探讨其卵泡发育周期;用免疫细胞化学方法，对雌二醇、孕酮、睾酮及其受体、原癌基因蛋白Myc、Fos、Myb在卵泡发育中的表达调控以及激素、受体、原癌基因三者之间的关系进行研究，以求深入认识两栖动物的卵子发育机制。结果如下： 1．分布于秦岭地区的中国林蛙4月至7月卵巢系数较低，从8月开始，卵巢系数明显上升，翌年3月达到最高。对卵巢内卵泡在全年的显微结构进行观察，依据Chester对两栖动物卵泡发育的分期标准，将卵泡发育分为4期，Ⅰ期，原始卵泡期，4月的卵泡多为Ⅰ期;Ⅱ期，卵黄形成前期，5月至7月的卵泡多为Ⅱ期;Ⅲ期，卵黄形成期，8月的卵泡多为Ⅲ期;Ⅳ期，卵黄形成后期，9月至翌年3月的卵泡多为Ⅳ期。雌性成体在每年3-4月之间排卵，5月至翌年3月为卵泡发育阶段。中国林蛙卵泡发育的个体差异较小。 2．在中国林蛙卵泡发育的卵黄形成前期和卵黄形成期，雌二醇都有较强的表达;而在卵黄形成后期，雌二醇表达减弱。雌激素受体同雌二醇的表达时期基本一致，雌激素受体的阳性反应部位在卵母细胞核和胞质内。表明雌二醇能通过结合核内和核外雌激素受体，对卵母细胞的发育进行基因或非基因调控。同时，雌激素受体在卵泡细胞的表达，说明雌二醇还可能结合其受体对产生雌激素的卵泡细胞进行自我调控。 3．在中国林蛙的原始卵泡期和卵黄形成前期，孕酮在卵泡的表达为阴性;在卵黄形成期和卵黄形成后期，孕酮表达在逐渐增强。提示孕酮除了促进卵泡发育成熟外，还可能具有抑制卵黄合成的作用。孕激素受体的阳性反应与孕酮的表达时期基本一致，其阳性反应多出现在卵母细胞胞质和核膜上，表明孕酮与其受体结合后通过经典的基因或非基因途径来调控卵母细胞发育成熟的。 4．在中国林蛀原始卵泡期和黄形成前期的卵泡中，睾酮作为雌二醇的合成前体仅有少量表达，雄激素受体也为弱阳性反应;在卵黄形成期和卵黄形成后期的卵泡中，睾酮和雄激素受体均有较强表达，可能与促进卵泡成熟有关，也可能抑制卵黄蛋白的合成。雄激素受体定位于卵母细胞的胞质和胞核内，表明睾酮可通 过基因或非基因途径调控卵母细胞的发育和成熟。 5.在中国林蛙的卵泡发育中，性类固醇激素的表达与其相应受体的表达结果 基本一致。在I和H期卵泡中，雌二醇及雌激素受体表达较强时，孕酮及孕激素 受体呈阴性，攀酮及雄激素受体表达较弱。而在工H和IV期卵泡中，孕酮及孕激 素受体与攀酮及雄激素受体均有较强表达时，雌二醇及雌激素受体的表达则减弱。 这些结果显示出三种性类固醇激素对其相应受体有自身调节作用，对其他受体有 异种调节的作用。另外，三种性类固醇激素在卵泡的不同发育时期存在的差异性 表达，与卵泡发育对激素的需求是相适应的。至于这种差异是由于它们在合成过 程中相互转换、还是在功能上相互抑制而形成，仍待研究。 ***在I和H期卵泡的卵母细胞胞质中呈阳性反应，在111和IV期中呈 阴性。说明Myc蛋白在中国林蛙早期卵泡中发挥较大作用，参与卵母细胞的生长。 在卵泡细胞中，Myc在I和H期卵泡表达较强，IH和IV期表达较弱。这与雌二 醇的表达时期基本一致，而与孕酮表达时期相反。 ***在I和H期卵泡的卵泡细胞中表达较弱，在111和IV期卵泡的卵泡 细胞中表达较强。这与孕酮的表达结果一致。表明Fos作为癌基因的蛋白产物可 以调节卵泡细胞合成幽类激素。 ***在工和H期卵泡的卵泡细胞和卵母细胞胞质中均有表达，而在IH 和IV期卵泡的卵泡细胞和卵母细胞中均无表达。表明Myb在卵母细胞的早期发育 中起一定作用，并参与调节卵泡细胞合成踌类激素。 声厂.