不良心理应激对人卵巢癌荷瘤裸鼠原位移植瘤差异蛋白表达的影响

作     者：刘静 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈琦

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：不良心理应激 卵巢癌 原位移植瘤 蛋白质 Western blotting 免疫组化 

摘      要：研究背景:卵巢癌(epithelial ovarian cancer EOC)是常见的女性生殖器恶性肿瘤,由于卵巢居于盆腔内,且早期临床症状无特异性,诊断非常困难,发现时已多有远处转移,病死率占女性生殖器官恶性肿瘤的首位。虽然卵巢癌手术、放疗和化疗等治疗方法的不断改进,但治疗效果尚不理想,近三十年死亡率并没有下降趋势,五年生存率始终徘徊在30%-40%,严重威胁女性的生命健康。随着现代医学模式向生物-心理-社会模式转换,逐渐发现肿瘤的发生、发展受多种因素的影响。不良心理因素能促进各种肿瘤的发生、发展已经成为定论,人们逐渐把肿瘤视为一种心身疾病,但其机制并不明了。因此,深入研究心理因素与肿瘤发生、发展的关系及其影响机制,并利用心理治疗来控制肿瘤的发生、发展,或通过改变肿瘤患者的免疫状态来阻止肿瘤生长,已越来越成为肿瘤医学研究所关注的重点。研究目的:1、构建不良心理应激人卵巢癌荷瘤裸鼠原位移植瘤动物模型。2、探索不良心理应激对荷人卵巢癌裸鼠原位移植瘤差异蛋白表达的影响,探寻慢性心理应激促进卵巢癌发生发展的分子机制。研究方法:1、裸鼠分组及建立裸鼠慢性心理应激模型;2、建立人卵巢癌荷瘤裸鼠皮下移植瘤模型;3、建立人卵巢癌荷瘤裸鼠原位移植瘤模型;4、原位移植瘤组织样本蛋白提取;5、Western blot检测不良心理应激对裸鼠原位移植瘤瘤体组织中Prdx1,SOD1,GSTO1,Nm23,CKM这5种蛋白表达的影响;6、免疫组化验证不良心理应激对荷瘤裸鼠瘤体组织中Prdx1,SOD1,GSTO1,Nm23,CKM这5种蛋白表达的影响;结果:1不良心理应激对原位移植瘤裸鼠的一般生存状态及裸鼠体重的影响实验开始的前3天应激组裸鼠反应强烈,焦躁不安,数日后有所适应,与对照组相比,应激组裸鼠整体的一般生长状态不佳,摄食量少,活动意愿及活动范围下降,反应迟钝,体重增加较对照组缓慢,但摄水量相当,试验过程中无裸鼠死亡。试验结束后,应激组裸鼠体重明显低于非应激组,组间比较体重差异有统计学意义(p0.05)。2不良心理应激对荷人卵巢癌原位移植瘤裸鼠瘤体重量的影响人卵巢癌组织裸鼠原位接种术后4周左右,可于裸鼠腹部扪及质硬的肿物样结节,随时间推移,肿物逐渐增大,腹围增加,皮下脂肪减少。大体上观,应激组裸鼠的腹部肿物生长要比非应激组更快。整个试验过程均无裸鼠死亡,原位移植瘤成瘤率100%。试验结束后仔细剥出肿瘤称重,应激组裸鼠瘤重明显高于非应激组,组间比较瘤体重量差异有统计学意义(p0.05)。3裸鼠原位移植瘤组织中5种蛋白的westernblotting结果westernblotting实验结果显示,经检测的5种蛋白中,其中prdx1,sod1,gsto1,nm23这4种蛋白的表达在应激组裸鼠原位移植瘤组织中明显高于对照组;而ckm蛋白的表达在应激组裸鼠原位移植瘤组织中明显低于非应激组,组间比较差异均有统计学意义(p0.05)。4人卵巢癌荷瘤裸鼠原位移植瘤组织的免疫组化结果应激组和非应激组裸鼠的原位移植瘤组织经he染色后经镜检证实为低分化腺癌,符合卵巢癌的病理特征。两组裸鼠的原位移植瘤组织均经免疫组织化学染色处理后镜检,与非应激相比,应激组裸鼠原位移植瘤组织中prdx1,sod1,gsto1,nm23蛋白阳性率明显高于对照组;而原位移植瘤组织中ckm蛋白则低于对照组,差异均有统计学意义(p0.05)。结论:本实验成功建立了不良心理应激荷人卵巢癌裸鼠原位移植瘤模型,进一步证实了不良心理应激可能导致卵巢肿瘤蛋白表达发生变化,而这些蛋白可能参与了细胞能量代谢的调节,细胞骨架的形成和细胞增殖、分化、凋亡等过程,从而来影响卵巢癌的发生、发展和转归,为揭示不良心理因素和卵巢癌的关系提供了新的分子生物学方面的理论依据。