硫酸软骨素的分离纯化及其抗凝血作用的研究

作     者：吕惠中 

作者单位：青岛大学 

学位级别：硕士

导师姓名：耿芳宋;崔瑞耀

授予年度：2003年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：猪 硫酸软骨素 提纯 抗凝血 

摘      要：本文旨在建立从猪软骨中分离纯化硫酸软骨素的方法，并研究硫酸软骨素的抗凝血作用，以及乙醛、乙醇对硫酸软骨素抗凝血作用的影响。从猪软骨中抽提出硫酸软骨素粗品采用了稀碱-酶解提取法;在纯化过程中，先采用凝胶过滤层析法对粗品进行脱盐、纯化，并比较了Sephedax G-25和Sephedax G-100的纯化效果，发现前者在完成脱盐的同时，尚能部分地去除蛋白质;脱盐后又采用了离子交换层析法进一步对其进行了纯化，并先后比较了三种离子交换剂和三种不同pH值的洗脱液对纯化效果的影响，最后确定了采用大孔离子交换剂D001-cc、在pH4.0的乙酸-乙酸钠缓冲液洗脱的条件下，纯化效果最佳。在对纯品的鉴定过程中，经Lowry氏法检测不出蛋白质的存在;薄层层析法也未出现蛋白质、肽和氨基酸区带;纯化的硫酸软骨素经醋酸纤维素薄膜电泳呈现单一区带，且泳动速度与Sigma公司硫酸软骨素标准品一致;红外吸收光谱法检测其特征与Sigma公司硫酸软骨素标准品极为相似，并与文献报道一致;高效液相离子色谱法测得样品中硫酸软骨素含量为99.7472％。提示纯化的样品中已不含蛋白质、肽、氨基酸及其他酸性粘多糖，已达到分析纯。为了研究硫酸软骨素的抗凝血作用，将不同浓度的硫酸软骨素加入兔全血中，测定其凝血时间(CT)，结果显示硫酸软骨素具有一定的抗凝血作用(14.33±0.72，P0.01)，但其作用远较肝素为弱(87.04±9.20);硫酸软骨素经与500mmol/L乙醛作用后，凝血时间明显延长(27.59±3.59，P0.05);而500mmol/L乙醇对硫酸软骨素及肝素的抗凝血作用无影响(P0.05);表明硫酸软骨素具有一定的抗凝血作用，但远较肝素弱，乙醛可以提高硫酸软骨素的抗凝血作用，而乙醇无此作用。