HCV F蛋白和负性共刺激分子2B4与HCV感染慢性化的关联研究

作     者：石丽萍 

作者单位：南京医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邓小昭

授予年度：2018年

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

主      题：HCV F蛋白 负性共刺激分子2B4 HCV感染 

摘      要：丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一种具有显著异源性和高度可变性的RNA病毒,病毒感染者极易发生慢性化、肝硬化,甚至出现肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。迄今为止,临床上还没有出现有效的预防性疫苗。HCV感染已成为一个全球性的公共卫生问题。目前,HCV感染最有效的预防方法是筛查HCV高危和易感人群,及早发现并积极治疗。因此,HCV慢性化感染转归的关联因素研究,如宿主免疫因素、生物学因素(病毒基因变异)、遗传因素的环境因素等,显得尤为重要。转框蛋白(Alternative reading frame protein,ARFP),即F蛋白,是由编码核心蛋白(HCV Core,Core,C蛋白)的核苷酸密码子移位产生的,与Core蛋白相似,发挥调节细胞内信号传导、物质代谢、细胞凋亡和诱导免疫应答的作用。2B4,即CD244,属于淋巴细胞信号活化分子(signaling lymphocyte activation molecule,SLAM)家族成员,主要表达于NK细胞、T细胞和粒细胞,与其配体CD48结合后发挥活化和抑制双相性的免疫功能。为探讨HCV F蛋白与负性共刺激分子2B4在慢性HCV感染中与宿主免疫因素的关联性,本研究共收集了45例慢性HCV患者(chronic hepatitis patient,CHP)及20例健康对照组的血液样本,分离并培养外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),采用特异性的2B4抗体阻断,运用酶联免疫吸附检测(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测阻断前后白细胞介素4(interlunkin,IL-4)、干扰素γ(interferon,IFN-γ)的表达水平,并对PBMCs的增殖情况进行了检测。免疫学实验结果显示,2B4抗体阻断前,HCV患者PBMCs中IFN-γ和IL-4分泌水平均较健康组高(P0.05),慢性HCV患者IFN-γ分泌水平较阻断前显著升高(P0.05),且HCV-F(-)组升高程度高于HCV-F(+)组;而IL-4分泌水平较阻断前明显降低(P0.05),且HCV-F(-)组降低程度低于HCV-F(+)组。该结果提示F蛋白与负性共刺激分子2B4在免疫信号调控方面存在相关性。此外,PBMCs的增殖实验显示,HCV患者的PBMCs相对活性均小于1,2B4抗体阻断前后HCV-F(+)组的相对活性均小于HCV-F(-)组(P0.05),2B4抗体阻断后,HCV-F(+)组和HCV-F(-)组的相对活性均有所上升(P0.05)。该结果提示,HCV感染可导致细胞增值活性减弱,细胞活性降低;F蛋白的存在可增强HCV对细胞增殖的抑制作用;阻断2B4信号通路可缓解HCV对HCV对细胞增殖的抑制作用。本研究基于中国华东地区汉族人群的遗传背景,从分子水平初步探讨并揭示了HCV F蛋白、负性共刺激分子2B4在HCV感染慢性化中的相关性,为进一步开展个性化的HCV感染的预防和治疗提供理论依据和临床研究资料,对于HCV感染的预防和临床治疗具有重要的意义。