毛酸浆免疫活性物质的精制及评价

作     者：张英蕾 

作者单位：东北林业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王萍

授予年度：2010年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：毛酸浆 免疫活性 小鼠试验 细胞试验 

摘      要：毛酸浆为酸浆属(Phylalis L.)多年生草本植物,学名为Physalis pubescens L.,英文名称为Hair Ground cherry,别名洋菇娘、黄菇娘等。我国主要产地为内蒙呼伦贝尔盟和黑龙江省大小兴安岭地区,具有药品和食物双重价值,剥去宿萼可直接食用,成熟毛酸浆果实呈黄色,味道酸甜可口,营养十分丰富。本试验通过动物及细胞试验对毛酸浆各级提取精制物的免疫功能评价。 1.通过昆明直系小白鼠动物试验评价毛酸浆果实各部分的免疫活性。对小鼠进行脏体比、迟发型超敏反应(DTH)、碳廓清试验和血清凝集试验,并据此对小鼠的免疫功能进行评价。毛酸浆的果浆对小鼠非特异性免疫有显著性影响;毛酸浆的果浆,果皮和籽对小鼠细胞免疫有显著性,对T淋巴细胞有调节作用。毛酸浆果实各部分对小鼠体液免疫的影响均不显著。酸浆的果浆部分最具有免疫增强活性。用水和60%的乙醇分别提取毛酸浆的果浆部分,并通过淋巴细胞增殖试验来评价这两种提取物的免疫功能活性。结果为醇提取物的免疫活性大于水提取物的免疫活性。 2.将小鼠分为17组,分别为对照组、模型组、毛酸浆果浆水提取物高中低剂量组、毛酸浆果浆20%醇提取物高中低剂量组、毛酸浆果浆40%醇提取物高中低剂量组、毛酸浆果浆60%醇提取物高中低剂量组、毛酸浆果浆80%醇提取物高中低剂量组。通过小鼠脏体比、迟发型超敏反应(DTH)、碳廓清试验和血清凝集试验,并据此对小鼠的免疫功能进行评价。结果为毛酸浆果浆40%的醇提取物具有较强的免疫活性,水提取物的免疫活性低于毛酸浆果浆40%的醇提取物,但是仍然具有显著的免疫活性。 3.将毛酸浆果浆40%提取物和水提取物经过大孔树脂AB-8的除杂精制,分别用蒸馏水和0.5 M NaCl洗脱,然后经过流动水透析,蒸发浓缩后冻干。将得到的四种组分通过淋巴细胞增殖试验和巨噬细胞中性红吞噬试验进行免疫活性评价。结果为醇提盐洗的组分有较强的免疫活性;醇提水洗和水提水洗组分的免疫活性低于醇提盐洗但仍具有显著的免疫活性,水提水洗组分的免疫活性不显著。 毛酸浆鲜果经打浆、除籽用1：20料液比,60℃40%乙醇水浴浸提2h;抽滤,旋转蒸发浓缩;提取液30ml稀释至60ml,上大孔树脂AB-8(3cm×24cm),水洗至流出液澄清;以250ml0.5M NaCl溶液洗脱得洗脱液;流动水透析48h,真空冻干;旋转蒸发浓缩,真空冻干。以此方法制得的精制组分为毛酸浆最具免疫活性意义的精制组分。最后通过扫描的吸收峰值和显色反应初步推断其中的主要成分为黄酮类物质。