平菇病毒dsRNA检测、脱毒及传播途径的研究

作     者：夏伟 

作者单位：福建农林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：吴小平;谢宝贵

授予年度：2011年

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

主      题：平菇病毒 dsRNA技术 菌丝尖端脱毒法 酶活 病毒传播途径 

摘      要：采用dsRNA技术对85株平菇菌株进行检测,结果显示,有34个菌株检测到dsRNA病毒,占检测菌株的40%,可见病毒dsRNA在平菇中是普遍存在的。根据电泳图谱显示,平菇菌株dsRNA共有4个片段,大小分别为8.0kbp,2.3kbp,2.0kbp,1.1kbp(根据Bi0CaPtMW软件计算)。依据菌株含有dsRNA条带的不同,可以大致分为五种类型。 利用Genebank上登录的平菇病毒序列,对其中三个较大的dsRNA片段共设计了10对引物进行反转录-PCR,最后各筛选到1对引物,对得到的cDNA进行克隆、测序。经blast比对分析,初步验证我们检测到的dsRNA病毒与邱立友等人从平菇天达300中提取的病毒是相同的。 采用菌丝尖端脱毒法连续脱毒四代,各得到一些脱毒程度不同的菌株。经dsRNA技术检测,病毒条带明显的减弱或是减少,说明病毒的含量和基因组都有减少。脱毒菌株平均生长速度与出发菌株相比提高了28.1%,羧甲基纤维素酶和漆酶的活性分别提高了33.3%和20.6%,出菇产量提高了13.6%,并且抗污染能力也有所提高。 平菇病毒dsRNA通过孢子垂直传播的几率仅7.7%,可见平菇病毒dsRNA通过孢子传播的效率很低。利用布勒杂交和单单杂交探究平菇病毒dsRNA的水平传播,结果表明在具有亲和性的菌株间dsRNA是可以传递的。