两种海洋生物抗炎活性成分研究

作     者：许娇娇 

作者单位：天津医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：乔卫

授予年度：2016年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 100701[医学-药物化学] 

主      题：软珊瑚 Sinularia flexibilis 海绵 Axinella sp. 抗炎 

摘      要：目的:为筛选出具有高效低毒、临床应用前景的先导化合物,本文对采自中国南海海洋生物软珊瑚Sinularia flexibilis和海绵Axinella sp.的化学成分及其抗炎生物活性进行了系统的研究。方法:将采集的软珊瑚Sinularia flexibilis进行甲醇提取,海绵Axinella sp.进行乙醇提取后,对软珊瑚的二氯甲烷层萃取物和海绵的正丁醇萃取物进行分离、纯化和结构解析。综合利用半制备HPLC,减压柱色谱,常压柱色谱,凝胶柱色谱,制备薄层色谱等分离纯化方法,从软珊瑚Sinularia flexibilis样品和海绵Axinella sp.样品中获得单体化合物。利用理化性质,并结合质谱(MS)、核磁共振波谱(1H NMR、13C NMR、2D NMR)等现代波谱技术,参考相关文献,确定化合物的平面结构和立体构型。对分离得到的单体化合物,在巨噬细胞(RAW 264.7)水平采用MTT法对抗炎活性进行了初步评价。在非细胞毒剂量下,利用Griess法检测各单体化合物对LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO的抑制活性。用酶联免疫吸附测定法(ELISA),测定LPS诱导下,部分化合物对抑制RAW264.7巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平的影响。结果:从软珊瑚Sinularia flexibilis样品中分离得到11个单体化合物,海绵Axinella sp.样品获得9个单体化合物,分别命名和鉴定为:sinulaflexiolide M(1),sinulaflexiolide N(2),sinulaflexiolide O(3),sinulaflexiolide P(4),sinulaflexiolide Q(5),sinulaflexiolide R(6),sinulaflexiolide I(7),sinulaflexiolide L(8),(-)14-deoxycrassin(9),dihydrosinularin(10),24-亚甲基胆甾醇(11),dibromophakellin(12),monobromophakellin(13),debromohymenialdisine(14),hymenialdisine(15),aldisin(16),3-bromoaldisin(17),尼克酰胺(18),胸腺嘧啶(19)及尿嘧啶(20)。经确认,化合物1-6为未见文献报道的新化合物,化合物1-10为西松烷型二萜类化合物,化合物12-17为吡咯生物碱类化合物。且化合物18-20首次从海绵Axinella sp.中分离得到。在非细胞毒剂量下,利用Griess法检测各单体化合物对LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO的抑制活性,结果显示化合物1、2、3、4、7、8、10、12、14、15、19对NO的生成有一定的抑制作用,在10μM浓度下,抑制率分别为18.4%、14.46%、18.40%、13.14%、15.77%、14.66%、55.6%、10.84%、11.21%、13.46%、9.52%。采用ELISA法,测定在LPS诱导下,部分单体对RAW264.7细胞分泌TNF-α抑制水平的影响,检测结果为化合物12、14对RAW264.7细胞分泌TNF-α有较弱的抑制活性,在10μM浓度下,抑制率分别为5.08%和0.70%。结论:该研究在一定程度上发展并丰富了中国南海软珊瑚Sinularia flexibilis和海绵Axinella sp.的生物多样性和化学多样性,也为化学分类学提供了化合物基础,补充了我国南海软珊瑚和海绵代谢产物的研究内容,为海洋天然产物的研发提供了科学依据。