细胞型朊蛋白在猪繁殖与呼吸综合征病毒侵染Marc-145细胞中作用的研究

作     者：马小元 

作者单位：中国农业科学院 

学位级别：硕士

导师姓名：张杰

授予年度：2017年

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：猪繁殖与呼吸综合征病毒 细胞型朊蛋白 Marc-145细胞 CD163 

摘      要：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)是当今制约全球养猪业发展的最主要的病原。细胞型朊蛋白(Cellular Prion Protein,PrPc)是一种在哺乳动物细胞表面广泛表达的膜糖蛋白,参与众多细胞事件。本实验室前期初步研究结果表明,PrPc可能在PRRSV侵染宿主细胞中起作用,但关于PrPc在PRRSV感染细胞中的具体作用还不明晰,本论文进一步探索了PrPc在PRRSV感染细胞中的作用。本论文通过2型PRRSV毒株QH-08感染不同处理的非洲绿猴肾细胞Marc-145,分析细胞在野生型、过表达PrPc蛋白以及阻断PrPc功能情况下对PRRSV复制的影响,实验获得了如下结果:(1)qPCR检测结果表明PRRSV在感染野生型Marc-145细胞24 h时,PrPc的mRNA水平达到最高峰,激光共聚焦显示PRRSV与PrPc发生了共定位。而与病毒脱衣壳和释放核酸功能有关的PRRSV受体CD163的mRNA水平在感染48 h时达到最高峰,并与PRRSV发生了共定位。这些实验结果表明,PrPc可能在PRRSV感染Marc-145的早期阶段起作用。(2)以pcDNA3.1/Myc-His(-)B为表达载体,构建含有PrPc编码基因的重组质粒,转染Marc-145细胞,对比处理前后感染的PRRSV mRNA含量的变化。结果表明,在Marc-145细胞过表达PrPc蛋白之后,PRRSV的m RNA水平显著上升。(3)以PrPc的单克隆抗体SAF-32阻断Marc-145细胞的PrPc功能,分析接种病毒后PRRSV mRNA含量的变化。结果表明,在SAF-32与Marc-145细胞孵育1 h之后再接种PRRSV 24 h时病毒mRNA的水平明显下降,并且与阻断剂呈现剂量依赖性关系。本研究运用不同的实验方法初步证明了PrPc在PRRSV感染Marc-145细胞早期过程发挥作用,其具体作用机制还有待进一步研究。该些结果为深入解析PrPc在PRRSV感染中的作用奠定了基础。