KiSS-1/GPR54系统在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化中的作用及其机制

作     者：张鹏 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：况海斌

授予年度：2013年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071008[理学-发育生物学] 

主      题：KiSS-1/GPR54 子宫 基质细胞 蜕膜 围植入期 

摘      要：目的： 探讨KiSS-1/GPR54系统在子宫内膜的表达、定位及其在蜕膜化中作用。 方法： 1、通过实时定量PCR、免疫组织化学等方法观察小鼠围植入期子宫内膜组织中KiSS-1和GPR54的表达水平及表达部位变化。 2、运用在体人工蜕膜化模型，观察KiSS-1、GPR54的表达是否受活化胚胎的影响。 3、构建去卵巢及性甾体激素处理的子宫模型，观察甾体激素对KiSS-1和GPR54表达的影响。 4、通过子宫内膜基质细胞分离、培养及体外诱导分化，检测在离休状态下蜕膜化过程中KiSS-1、GPR54表达水平的变化。 5、通过RNA干扰技术，观察KiSS-1对小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化的影响。 结果： 1、实时定量PCR结果显示，在妊娠D1-D5天，KiSS-1、GPR54mRNA表达量均较低。随着蜕膜化的进程（妊娠D6-D8天），与妊娠D1天相比，KiSS-1和GPR54mRNA的表达量均显著性增加（P0.05);E2与其拮抗剂Tam共同处理组，则进一步增强E2对KiSS-1mRNA表达上调的效应(P0.05)。 4、分离培养的小鼠子宫内膜基质细胞，免疫荧光法检测显示，基质细胞表达Vimentin而不表达Cytokeratin。在体外经E2和P4联合处理24-72h后，基质细胞表现出的形态符合蜕膜细胞的特异性形态学特征;免疫印迹法和定量PCR检测显示，蜕膜化的标记分子，包括Cyclin D3蛋白、PR蛋白以及dPRP mRNA的表达水平在体外培养48h、72h后均显著性增加。同时KiSS-1和GPR54mRNA的表达水平也随时间逐渐增加。 5、在体外培养的子宫基质细胞蜕膜化模型中，转染KiSS-1siRNA后，与对照组相比(无义序列组)，在培养后24h、48h、72h，KiSS-1mRNA表达水平均显著性下降(P0.01,0.05)，说明KiSS-1siRNA能特异性抑制了KiSS-1mRNA的表达。KiSS-1基因下调同时，蜕膜化的标记分子dPRP (mRNA)、Cyclin D3(蛋白)和PR(蛋白)的表达水平也均相应下调，提示KiSS-1基因的下调能抑制子宫基质细胞蜕膜化进程。 结论： 在妊娠早期，KiSS-1/GPR54系统时空性的表达于母胎界面，且受E2、P4及子宫内膜蜕膜化的影响;干涉KiSS-1后子宫内膜基质细胞的蜕膜化受到明显抑制，说明KiSS-1/GPR54系统具有促进子宫内膜的蜕膜化作用。