西达本胺对K562/G01细胞增殖抑制、凋亡及Hedgehog信号通路相关机制的研究

作     者：张黎琴 

作者单位：山西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：马梁明

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：西达本胺 K562/G01 BCR/ABL Gli1 CyclinD2 

摘      要：目的:本研究旨在观察西达本胺(Chidamide)对伊马替尼耐药的慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562/G01增殖抑制和诱导凋亡作用,并检测Hedgehog信号通路相关基因和蛋白的表达。诣在探讨西达本胺对K562/G01细胞株可能的作用机制,为西达本胺应用于伊马替尼耐药的CML患者的临床治疗提供理论基础。方法:以0-60μmol/l之间不同浓度的西达本胺作用于K562/G01细胞,分别培养24h、48h和72h。采用四唑蓝比色(MTT)法测定西达本胺作用于K562/G01细胞后的增殖抑制情况,采用SPSS20.0软件计算半数抑制浓度值(IC50);Annexin V/PI流式法测定不同时间点西达本胺作用于K562/G01细胞的凋亡率;RQ-PCR检测Gli1mRNA、CyclinD2mRNA、BCR/ABLmRNA表达情况;Western Blot法检测BCR/ABL、Gli1、CyclinD2蛋白及组蛋白H3的表达情况。每试验重复3次,结果数据以均数±标准差sx,%)(±表示,P0.05为统计学意义。结果:1.西达本胺对K562/G01细胞有明显的增殖抑制作用,且增殖抑制作用具有剂量-时间双重依赖性。当药物浓度由2.5μmol/l增加到60μmol/l后,24h增殖抑制率由(10.57±0.48)%上调到(63.08±0.79)%,48h增殖抑制率由(27.10±0.49)%上调到(74.67±1.78)%;72h增殖抑制率由(32.61±1.44)%上调到(84.48±3.04)%。2..Annexin V/PI双染色法流式细胞术检测0、10、30μmol/L的西达本胺浓度对K562/G01细胞的凋亡情况,不同浓度的药物作用不同时间点后,凋亡率呈现明显剂量依赖性。48h时间点的细胞凋亡率分别为(1.1±0.36)%、(13.8±1.50)%、(31.2±2.79)%,72h时间点的细胞凋亡率分别为(4.4±1.45)%、(33.7±1.72)%、(62.4±2.68)%。***-PCR检测BCR/ABL、Gli1、CyclinD2 mRNA表达水平均出现明显下调。*** blot法检测BCR/ABL、Gli1、CyclinD2蛋白水平均明显下降、组蛋白H3表达水平明显增加。结论:1.西达本胺对K562/G01细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用。增殖抑制作用具有时间-剂量双重依赖性,诱导凋亡作用具有剂量依赖性。2.西达本胺对K562/G01细胞增殖抑制、诱导凋亡作用与抑制BCR/ABL基因、组蛋白H3乙酰化修饰有关。3.西达本胺可以通过Hedgehog信号通路活性调节来实现对K562/G01细胞增殖抑制及诱导凋亡作用。