长期低硒、低碘对仔代发育期大鼠甲状腺形态结构及PCNA、TTF-1表达的影响

作     者：姜洋 

作者单位：汕头大学 

学位级别：硕士

导师姓名：田东萍

授予年度：2007年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

主      题：硒 碘 大鼠 甲状腺 增殖细胞核抗原 甲状腺转录因子1 

摘      要：背景与目的 碘缺乏引起甲状腺形态结构以及功能的改变在人和动物的体内得到充分证实。在这一过程中微量元素硒也参与其中。其机制研究目前主要集中在硒防御超氧化物损伤以及硒影响甲状腺激素的代谢过程。 以往这方面的动物研究大多以原代成年动物为研究对象，而流行病学调查显示世代繁衍生息在低硒低碘地区的人们，其仔代的甲状腺往往受到更严重的损伤。目前对低硒低碘两因素在仔代不同发育期甲状腺中有什么样的作用还未见有报道。本实验在课题组前期已经成功建立的动物模型基础上，选定长期持续低硒低碘喂养繁殖的仔三代三个不同发育时间点(4日龄、21日龄、成年)的大鼠甲状腺，对其进行组织形态学观察、体视学测量以及检测其甲状腺上皮细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)与甲状腺转录因子1(TTF-1)的表达情况，从滤泡形态、细胞增殖情况以及细胞的功能状态等几方面来进行研究，探讨低硒低碘对仔代不同发育期大鼠甲状腺形态和功能的作用。 方法 选取本课题组前期成功建立的人工低硒，低碘饲料喂养繁殖的SD大鼠动物模型仔三代胎鼠(F3E)、4日龄(F3P4)、21日龄(F3P21)、成年(F3A)四个发育时间点的大鼠的甲状腺组织做为研究对象，每发育时间点大鼠分四组：①对照组(control)、②低硒组(Se)、③低碘组(I)、④低硒低碘组(SeI)。分别进行以下实验研究： 1．HE染色后组织学观察F3E、F3P4、F3P21、F3A各个组别的甲状腺形态结构变化。 2．HE染色后体视学测量F3P4、F3P21、F3A各个组别甲状腺的平均滤泡数、平均滤泡腔面积，平均滤泡上皮细胞高度。 3．免疫组织化学染色检测F3P4、F3P21、F3A各个组别甲状腺滤泡上皮细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。 4．免疫组织化学染色检测F3P4、F3P21、F3A各个组别甲状腺滤泡上皮细胞的甲状腺转录因子1(TTF-1)的表达。 结果 1．组织形态观察结果：F3A、F3P21、F3P4三个发育时间点：Se组大鼠甲状腺与对照组相比较结构相似，其中F3ASe组中部分大鼠甲状腺滤泡有坏死纤维化改变。I组与SeI组甲状腺形态结构改变相似，都为小滤泡增生改变，腔小甚至无腔，胶质稀薄，上皮细胞立方至高柱状。F3E甲状腺与其他日龄相比呈现明显的幼稚状态，细胞密集，典型的滤泡少。 2．体视学测量结果：①平均滤泡数：F3A平均滤泡数Se组与对照组无差别(P0.05)，I组与SeI组滤泡数多于对照组与Se组(P0.01)。F3P21平均滤泡数Se组与对照组无差别(P0.05)，I组与SeI组滤泡数多于对照组与Se组(P0.01)。F3P4平均滤泡数Se组、I组与对照组无差别(P0.05)，SeI组滤泡数多于其他各组(P0.05)。②平均滤泡腔面积：F3A Se组与对照组无差别(P0.05)，I组与SeI组滤泡腔面积明显缩小(P0.01)，其中SeI组缩小最明显。F3P21对照组与Se组以及I组与SeI组之间没有差别(P0.05)。I组与SeI组的滤泡腔面积明显小于对照组与Se组(P0.01)。F3P4 Se组与SeI组之间有差别(P0.05)，其他各组之间均无差别(P0.05)。其中I组与SeI组的滤泡腔面积最小。③平均上皮细胞高度：F3A Se组与对照组之间无差异(P0.05)。I组与SeI组细胞高度增加(P0.01)，其中SeI组滤泡上皮细胞最高。F3P21各实验组均与对照组有显著差别(P0.01)，其中Se组细胞最低，SeI组细胞最高。F3P4对照组与Se组以及I组与SeI组之间没有差别(P0.05)。I组与SeI组细胞高度比对照组明显增加(P0.01)，其中SeI组细胞最高。 3．PCNA表达结果：F3A、F3P21、F3P4大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的表达为从对照组到SeI组表达逐渐增强。对照组与Se组的表达多为阴性或弱阳性，I组与SeI组的表达明显增强(多集中在+++～++++)。四组的强阳性(++++)表达百分比逐渐增加：F3A各组分别为Control组0％，Se组6.3％，I组28.6％，SeI组50％。F3P21各组分别为Control组0％，Se组0％，I组16.7％，SeI组21.4％。F3P4各组分别为Control组0％，Se组0％，I组42.9％，SeI组33.3％。 4．TTF-1表达结果：F3A对照组的表达全部集中在阴性或弱阳性，Se组、I组与SeI组的表达明显增强(多集中在++～++++)。四组强阳性(++++)表达百分比分别为Control组0％，Se组23.5％，I组12.5％，SeI组53.8％。F3P21四组的表达强度多集中在(+++～++++)，四组的强阳性表达百分率达到了Control组61.5％，Se组55.6％，I组90％，SeI组85.3％。F3P4四组的表达之间没有差异。都无强阳性表达。 结论 1．单纯的低硒可导致仔三代不同发育期大鼠的甲状腺形态结构发生改变，使其滤泡数量增多，体积缩小，上皮细胞增生。但作用的程度小于低碘。并且低硒低碘的作用有叠加效应。低硒的这种作用对各个发育日龄的影响程度不同，是随着个体发育的成熟而逐渐明显。 2．低硒与低碘都可使仔三代大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)表达增强，低硒的作用弱于低碘，并且低硒低碘的作用有叠加效应。低硒增强PCNA表达的作用在4日龄时不明显，21日龄时有表现并保持到成年，是一个随着个体的发育成熟而逐渐明显的过程。 3．低硒与低碘都可使仔三代大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的甲状腺转录因子1(TTF-1)表达增强，低硒的作用弱于低碘，并且低硒低碘的作用有叠加效应。低硒增强TTF-1表达的作用在4日龄时没有表现，21日龄时有表现并且在成年时表现最明显，是一个随着个体的发育成熟而逐渐明显的过程。