猪圆环病毒2型（WH株）灭活疫苗的研究

作     者：郭海兵 

作者单位：华中农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：何启盖

授予年度：2009年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：猪圆环病毒2型 灭活疫苗 最小免疫剂量 免疫效力 

摘      要：猪圆环病毒2型(PCV2)感染是造成断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要原因,其它协同因素可增强疾病的严重程度。目前PCV2已呈全球分布,猪群感染率越来越高。至目前为止,国内外的试验表明,疫苗是预防此病的主要措施之一,但我国还没有商业化的疫苗问世。 本研究利用本实验室从临床发病猪中分离鉴定的增殖滴度高的猪圆环病毒2型WH株,进行了灭活苗的研究,为我国预防和控制该病奠定了基础,具体研究内容如下: ***2灭活苗的制备 猪圆环病毒2型(PCV2)WH株同步接种到PK-15细胞悬液中,细胞形成单层后,加入适量300mmol/L D-氨基葡萄糖,于37℃作用30min,弃去D-氨基葡萄糖,加入DMEM维持液继续培养48h,收获病毒,经0.3%甲醛灭活后与适量的美国埃索MARCOL52油佐剂,制备灭活苗并进行无菌检验及物理性状检验。 ***2灭活苗最小免疫剂量测定 用含10TCID、10TCID和10TCID等不同抗原含量的疫苗进行猪体免疫和攻毒保护性试验,通过ELISA方法检测抗体、攻毒后体温变化、临床表现、病毒血症及病毒在组织中的分布等指标对疫苗免疫效果进行评价。进一步将最小免疫量的灭活苗按1、2、3ml免疫猪,按上述方法进行评价。结果显示:①10TCID组免疫猪三周后,ELISA抗体水平达到最高,5头猪全达到1:80,其中3头猪达到1:160,2头达到1:320,而10TCID和10TCID抗原含量的灭活苗免疫猪后未检测到特异性抗体。②最小免疫量的灭活苗1ml、2ml、3ml免疫猪均能产生较好的ELISA抗体,但2ml组效果明显优于其它各组。③免疫四周后攻毒,对照组体温高于免疫组,病毒血症检测及病毒DNA在组织中的分布检测结果表明该疫苗能够有效降低猪体的带毒,但是10TCID抗原含量的灭活苗2ml组效果最佳。 ***2灭活苗免疫效力试验 用灭活苗2ml免疫猪群,于免疫后1、2、3、4周分别进行攻毒保护性试验,通过攻毒后体温变化、临床表现、病毒血症及病毒在组织中的分布等指标对疫苗免疫不同时间的效力进行评价。结果显示,免疫一周和两周后攻毒,免疫组和对照组各指标基本没有差异;免疫三周和四周后攻毒,免疫组均只有两头出现病毒血症及解剖组织检测到病毒,但对照组每头都检测到病毒血症及解剖组织检测到病毒。说明该疫苗免疫三周后可以对猪坚强保护。 ***2灭活苗安全性试验 用单倍剂量和双倍剂量灭活苗免疫仔猪,测定免疫前后的体温,观察猪群的采食情况,触摸局部,有无肿块。免疫后28天,每组解剖2头猪,观察疫苗的吸收状况。结果,免疫前后猪群没有体温升高的现象,采食和精神正常,注射部位未见肿块出现。解剖后,注射部位也未见有白色油乳剂样物质存在。说明单倍和2倍剂量接种后对猪是安全的。