白藜芦醇对大鼠海马CA1区诱发癫痫样活动的抑制作用

作     者：尤竹燕 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王烈成

授予年度：2012年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：癫痫 海马 白藜芦醇 群峰电位 

摘      要：目的 本研究采用正常大鼠海马脑片灌流离子型γ-氨基丁酸受体（GABAA受体）拮抗剂荷包牡丹碱（bicuculline，Bic）引起癫痫样活动;以及应用脑立体定位技术在大鼠海马CA3中心区通过微量注射海人草酸（Kainic acid，KA）来建立颞叶癫痫（temporal lobe epilepsy，TLE）大鼠模型。采用离体脑片细胞外场电位记录方法观测不同浓度白藜芦醇（resveratrol, Res）对癫痫大鼠海马CA1区场电位的影响，为临床研发抗癫痫新药提供理论依据。 方法 1模型建立 1.1颞叶癫痫模型Wistar雄性大鼠，体重200～240克，清洁级。大鼠经水合氯醛（350mg/kg）腹腔麻醉后，固定于立体定位仪上，在右侧海马CA3中心区（AP:–4.0mm,ML:4.4mm, DV:3.8mm）用微量注射针注入2.5～3μl KA（0.4μg/μl），注射15min，留针10min，术后缝合头皮。大鼠急性发作等级参照Racine标准分级，达到Ⅳ级及以上视为建模成功，模型大鼠在手术后2～4周进行细胞外场电位记录。 1.2急性癫痫样活动正常大鼠离体海马脑片灌流GABAA受体拮抗剂Bic（30μmol/L）以引起癫痫样活动。 2离体脑片制备大鼠用2%戊巴比妥钠麻醉后迅速断头取脑，置于持续给予95%O2和5%CO2混合气的4℃人工脑脊液（artificial cerebrospinal fluid,ACSF）中。待脑组织冷却后沿海马槽纤维走向切成400μm厚的脑片，并将其移至含ACSF（30±2℃）的孵育槽中，持续通入混合气，孵育1～2h。 3场电位记录将孵育的脑片移至记录槽，持续灌流95%O2和5%CO2混合气饱和的ACSF，灌流速度2ml/min，温度32℃。刺激海马辐射层Schaffer侧支通路，在CA1区锥体细胞层记录群峰电位（population spike, PS）。 4统计学分析采用SPSS13.0统计软件分析。实验结果以x±SEM表示，组间均数用t检验进行比较，P 0.05具有统计学意义。 结果 1. Res对正常大鼠海马CA1区PS的影响电刺激离体海马脑片Schaffer侧支，在CA1区锥体细胞层通常可记录到单个PS，在灌流正常脑片的ACSF中分别加入低、中和高剂量的Res（分别为5μmol/L、15μmol/L和50μmol/L），当含有相应浓度Res的ACSF灌流脑片后，记录的PS幅度均无明显变化（n=8, P﹥0.05）。 2. Res对大鼠海马CA1区诱发癫痫样放电的影响大鼠海马CA1区癫痫样放电的形成可通过脑片急性灌流含Bic的ACSF或在体海马脑区注射KA诱发TLE。灌流含Bic（30μmol/L）的ACSF20min后，记录到的场电位为多个PS的痫样电位，再分别灌流添加低、中剂量Res（5、15μmol/L）的ACSF后，前4个PS幅度均无明显变化（分别为n=8, P﹥0.05;n=8, P﹥0.05）;灌流添加高剂量Res（50μmol/L）的ACSF后，前4个PS幅度均出现显著性降低，（n=8, P﹤0.01），并且PS数目也明显减少，为灌流前的82.02±1.3%（n=8, P﹤0.01）。在TLE模型大鼠海马脑片上记录到的场电位为多个PS的痫样电位，分别灌流含低、中剂量Res（5、15μmol/L）的ACSF后，前4个PS幅度均无明显变化（分别为n=6, P﹥0.05;n=6, P﹥0.05）;灌流含高剂量Res（50μmol/L）的ACSF后，前4个PS幅度均出现显著性降低（n=6, P﹤0.01），PS数目也明显减少，为灌流前的84.58±2.4%（n=6, P﹤0.01）。 结论 1.低、中、高剂量的Res （5μmol/L,15μmol/L和50μmol/L）对正常大鼠海马CA1区的PS没有明显的影响。 2.低、中剂量的Res （5μmol/L和15μmol/L）的对大鼠海马CA1区诱发的癫痫样放电活动没有明显的影响，而高剂量的Res （50μmol/L）对大鼠海马CA1区诱发的癫痫样放电活动有部分抑制作用。