不同粗糙度的聚苯乙烯（PS）微球对巨噬细胞功能影响及其机制研究

作     者：陈文娇 

作者单位：华中科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：涂亚庭;陶娟

授予年度：2016年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：微流控技术 粗糙微球 巨噬细胞 IL-1β NLRP3 

摘      要：目的:检测聚苯乙烯(PS)微球的表面粗糙程度对巨噬细胞分泌IL-1β的影响及其机制。方法:1.应用微流控技术及乳液-溶剂挥发法制备尺寸均一,表面结构可调控的不同粗糙程度微球,用扫描电镜(SEM)及透射电镜(TEM)对其表面形貌进行表征;2.共聚焦显微镜下观察了不同时间段Ana-1细胞系对不同粗糙程度微球的摄取和吞噬,并应用流式细胞术对不同粗糙程度微球的吞噬率进行了比较;3.用ELISA法检测不同粗糙程度微球刺激Ana-1巨噬细胞释放炎性细胞因子IL-1β并比较其差异;4.腹腔注射入不同粗糙程度微球并用流式检测中性粒细胞的募集,验证其在小鼠体内引起的炎症反应;5.用PCR反应验证微球刺激巨噬细胞引起NLRP3炎性复合体m RNA的变化。结果:1.通过微流控技术及乳液-溶剂挥发法这种方法可以获得表面粗糙程度可调控的尺寸均一的不同粗糙程度PS微球;2.共聚焦显微镜和流式细胞术结合可以得出:PS微球在12 h和24 h不同时间段均可以被Ana-1细胞摄取吞噬,不同粗糙程度微球被细胞吞噬率不同,并且粗糙微球周围可以募集更多的Ana-1细胞;***实验显示出微球与巨噬细胞共孵育后,不同微球组与PBS组相比,刺激细胞释放的IL-1β多(P0.05),而粗糙微球组相对光滑微球组释放量更高;4.体内实验表明:微球可以刺激腹腔炎症,募集中性粒细胞,因为微球组比阴性对照(PBS)组募集更多的中性粒细胞(P0.05),而粗糙微球比光滑微球刺激的中性粒细胞募集量更多(P0.05);***反应中得出:微球刺激细胞NLRP3、ASC、caspase-1 m RNA均有上调,且不同粗糙程度微球的表达量不同。结论:通过该方法可以获得表面粗糙程度可控的聚合物微球,从而验证粗糙程度对细胞的促炎性方面(IL-1β分泌)有影响,为以后可降解、生物相容性较好的佐剂或治疗性微球载体的设计提供新的思路。