龙须菜多糖硫酸基含量与抗流感病毒活性关系的研究

作     者：廖灶辉 

作者单位：汕头大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈美珍

授予年度：2008年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：龙须菜多糖 提取纯化 硫酸化 抗病毒 

摘      要：本文研究了龙须菜多糖抗流感病毒活性及其作用机制以及多糖硫酸基含量与抗病毒活性之间的关系。同时优选多糖的提取分离条件和选择适宜的脱硫及硫酸化方法。主要研究结果如下: 用正交实验优选龙须菜多糖的提取条件,所得最适提取条件为:温度100℃,时间5h,料水比1:100;在该条件下提取多糖得率为样品干重的22.97%;经纯化后的龙须菜精多糖（PPGL）的糖含量为94.48%,蛋白质含量为0.95%,其硫酸基含量为13.25%;用DEAE C-52分离PPGL可得到GL-1、GL-2和GL-3三个明显洗脱峰,表明PPGL至少含有3种级分;GL-1、GL-2和GL-3三种级分经紫外分析,它们分别在260nm与280nm波长处均无吸收峰,说明样品中已基本除去蛋白质、核酸等杂质,为较高纯度的组分;GL-1、GL-2和GL-3分别过Sephadex G -100凝胶柱层析所得的洗脱曲线均为单一对称峰,表明其为均一纯品。经测定GL-1、GL-2和GL-3的分子量及硫酸基含量分别为5.1kD、52kD、67kD与0.00%、12.63%、22.61%。 以HCl-甲醇法、稀HCl法和溶剂法对PPGL进行脱硫,所得脱硫多糖的SO42-含量分别为1.75%、0.00%和2.25%;由取代度计算公式得三种脱硫方法的DS分别为0.09、0.00和0.12。经比较认为,在三种脱硫方法中HCl-甲醇法最适合PPGL的脱硫处理。 采用Wolfrom改良法对HCl-甲醇法制得的脱硫多糖进行硫酸化处理,用以制备硫酸化多糖。以SO42-含量和DS的最大值为指标选择硫酸化条件,所得最佳硫酸化条件是:氯磺酸与吡啶体积比为1:4、温度65℃、时间2h,在此条件下制备的硫酸化多糖其SO42-含量为17.53%,DS为2.01。 抗病毒实验结果显示,PPGL对流感病毒H1-364的抑制效果要比对流感病毒H3-616的抑制效果好;选定以H1-364作为病毒株,用PPGL、脱硫多糖、不同硫酸基含量的硫酸化多糖（S1、S2、S3）和纯多糖（GL-1、GL-2和GL-3）八个样品分别对感染H1-364的MDCK细胞进行抗病毒实验,结果表明:PPGL的抗病毒效果最好,其最大病毒抑制率为88.82%;多糖抗病毒能力在一定范围内随多糖中硫酸根含量的增加而增大,当多糖SO42-含量和DS分别在13%和1.10附近时,其抗H1-364病毒的能力最强,而硫酸根含量过高或过低对H1-364病毒的抑制作用都有所下降。 对PPGL抗病毒机理初步研究的结果表明,PPGL对H1-364无直接灭活作用,不影响病毒的释放,可通过干扰病毒对宿主细胞的吸附,抑制病毒的复制实现其抗流感病毒H1-364的作用。 本研究首次探讨龙须菜多糖抗病毒活性,揭示了多糖硫酸基含量与抗病毒活性的关系。研究结果对于丰富龙须菜生理活性的研究内容具有重要的理论意义和学术价值,对合理开发利用龙须菜多糖有重要的指导意义。