USP18对不同干扰素抗HBV的影响及可能机制

作     者：张小梅 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：秦波

授予年度：2018年

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

主      题：乙型肝炎病毒 泛素特异性蛋白酶18 干扰素α 干扰素λ 

摘      要：目的:慢性乙型肝炎是全球关注的健康问题,泛素特异性蛋白酶18属于干扰素刺激基因,本研究旨在探讨USP18对Ⅰ型干扰素(IFNα)及Ⅲ型干扰素(IFNλ)抗HBV的影响及其相关机制。方法:将HepG2.2.15细胞随机分为空白对照组、USP18过表达+IFNα组、空载+IFNα组、USP18过表达+IFNλ组、空载+IFNλ组。空白对照组未经任何处理,其余几组采用脂质体转染法分别转染pEGFP-USP18,PEGFP-N1 质粒 DNA 48 小时后,采用 Western blot 检测USP18的相对表达量。其次,分别用IFNα及IFNλ对转染48小时后的细胞进行24小时的药物干预,采用Western blot,RT-qPCR检测JAK/STAT信号通路和ISG15,MXA,IFIT1及HBcAg的表达情况;化学发光法检测细胞上清中的HBeAg及HBsAg;PCR荧光探针法检测细胞上清中的HBV-DNA表达情况。结果:首先,USP18蛋白相对表达量在USP18过表达组中最高,USP18成功过表达,差异有统计学意义(P0.05);其次,在IFNα处理组中,空载组中HBsAg,HBeAg及HBV-DNA的表达均低于USP18过表达组,差异有统计学意义(P0.05),而IFNλ处理组中,三者差异不大;并且,在IFNα干预组中,阳性对照组的抗病毒蛋白ISG15,MxA,IFIT1表达均高于USP18过表达组,差异有统计学意义(P0.05),而在IFNλ干预组中仍无太大差别;最后,JAK/STAT信号通路上的pSTAT1在IFNα干预组中,USP18过表达组明显低于空载组,差异有统计学意义(P0.05),反之,在IFNλ干预组中,试验组与对照组仍无明显差别。结论:USP18通过抑制JAK/STAT信号通路的激活,从而减少抗病毒蛋白的表达,最终降低了 IFNα抗HBV的活性及复制能力。相比之下,USP18对IFNλ通过JAK/STAT通路抗HBV无明显抑制作用。