冻干日本医蛭及日本医蛭种苗的质量标准研究

作     者：丁钊 

作者单位：湖北中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈科力

授予年度：2018年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 100703[医学-生药学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：日本医蛭 质量标准 药效学 稳定性试验 

摘      要：目的:冻干日本医蛭是一种经低温干燥得到的新型炮制品。本研究通过考察其质量、稳定性和安全性,研究其毒理和药效学,最终建立冻干日本医蛭质量标准,保证其质量和安全。同时,通过对日本医蛭卵茧和种苗进行研究,建立日本医蛭卵茧质量分级标准和种苗质量标准,有利于发展日本医蛭的生产,保证冻干日本医蛭具有可靠的资源供应,对中药材水蛭的长远发展具有深刻的意义。方法:1)通过一系列的适用性实验来建立冻干日本医蛭的微生物检测方法。2)通过考察温度、湿度和强光照射对冻干日本医蛭的影响,以及加速试验来确定包装和贮藏条件。3)通过最大耐受量试验(MTD)来考察用量的安全性,通过对小鼠出血时间和凝血时间的影响及大鼠急性血瘀模型来考察药效。4)通过性状和薄层色谱法鉴别,通过对水分、总灰分、酸不溶性灰分、酸碱度、重金属及有害元素、黄曲霉素、微生物进行限量来控制和抗凝血酶活性测定控制冻干日本医蛭质量,建立质量标准。5)通过对日本医蛭卵茧重量、长宽、出苗率、孵化率进行研究,确立卵茧质量分级标准。6)通过对各周龄日本医蛭种苗的形态、重量、长短、活力进行研究,起草种苗质量标准。结果:1)冻干日本医蛭基本无抑菌作用,接种5种阳性实验菌株的回收比值均在0.5.0之间,因此可采用平皿法(常规法,每皿1mL)进行微生物计数。2)冻干日本医蛭在高温、高湿、强光等条件下,抗凝血酶活性均明显下降;在加速试验中,冻干日本医蛭的抗凝血酶活性呈缓慢下降趋势,第6个月抗凝血酶活性仍高于200U/g。3)最大耐受量试验剂量为26.4g生药/kg,是药典规定最大用量的58倍,小鼠未出现死亡及不良反应;冻干日本医蛭可明显延长小鼠的BT和CT,延长急性血瘀证大鼠的PT、TT、APTT,有较强的抗凝血作用;可抑制大鼠血小板聚集,降低大鼠全血黏度;但对Fibg和血浆黏度无明显作用。4)冻干日本医蛭的性状能反应日本医蛭的动物鉴别特征;供试品薄层色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的紫红色斑点,紫外光灯(365nm)下显相同的橙红色荧光斑点;增加了微生物检测项,含量、水分、总灰分、酸不溶性灰分、酸碱度、黄曲霉素等限量均在药典的基础上高。5)选择重量作为日本医蛭卵茧分级的依据,一级卵茧重量在0.08g.16g之间,孵化率为90%,出苗率6.78尾/枚。6)规定了各周龄日本医蛭种苗的形态特征和在体长、重量、活力等方面存在的差异,其中实线苗比虚线苗生长缓慢。结论:日本医蛭具有较高的抗凝血酶活性,但传统的晒、烫等加工炮制方法会破坏日其有效成分水蛭素;此外,水蛭药材没有包装、随意放置,容易感染黄曲霉菌和其它微生物。与传统加工炮制品相比,冻干日本医蛭的抗凝血酶活性有极大提高。因此,建立冻干日本医蛭的质量标准,在确保其真实性和抗凝血活性的同时,在冷藏条件下,采用药用低密度聚乙烯袋作为直接接触药材的内包装材料,外套药用包装用聚酯/铝/聚乙烯复合膜袋,小剂量密封包装的方法可以杜绝在流通和储存环节污染黄曲霉素和其它微生物的可能性,既提高了水蛭药材的生物效价又提高了药材商品的安全性。本研究通过对日本医蛭卵茧重量、出苗率、孵化率进行研究,制定了卵茧质量分级标准;通过对各周龄日本医蛭种苗的形态、长度、重量、活力进行研究,起草了日本医蛭种苗质量标准。日本医蛭卵茧质量分级标准可以保证卵茧质量,日本医蛭种苗质量标准可以保证种苗质量,这对提供可靠种苗,大力发展日本医蛭的人工养殖,缓解水蛭药材市场资源紧缺有着重大意义。