稳定过表达CD14胃腺癌SGC-7901细胞体系的构建

作     者：孙艳珍 

作者单位：广西中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈远能

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：胃癌 SGC-7901细胞 CD14过表达 慢病毒 

摘      要：目的:构建能够使CD14稳定过表达的慢病毒载体。建立稳定过表达CD14的胃腺癌SGC-7901细胞系,探讨慢病毒载体转染SGC-7901细胞后CD14的mRNA及蛋白的表达变化,奠定研究胃癌发病机制的基础。方法:构建CD14过表达的慢病毒载体。分组:空白对照组（SGC-7901组）、阴性对照组（NC-LV组）、CD14过表达组（LV-CD14组）,NC-LV组为用不含CD14的慢病毒载体转染SGC-7901细胞,LV-CD14组利用CD14过表达载体转染SGC-7901细胞,空白对照组不做任何处理。随后用Real-time PCR和Western blot检测mRNA和蛋白的表达,探讨CD14过表达对总蛋白表达的影响。结果:成功构建过表达CD14的慢病毒载体。胃腺癌SGC-7901成功被过表达CD14的慢病毒载体转染,筛选出稳定过表达CD14的胃腺癌SGC-7901体系。LV-CD14组细胞CD14的mRNA相对表达水平是NC-LV组的4.32倍,是空白对照组的4.82倍,LV-CD14组相对表达水平与NC-LV组、空白对照组相比,差异有统计学意义（P0.05）。NC-LV组、SGC-7901组差异不明显（P0.05）。LV-CD14组的蛋白表达量为NC-LV组的1.700倍,为空白对照组的1.7419倍。稳定过表达CD14的细胞,mRNA和蛋白表达水平上都有升高,与NC-LV组、空白对照组相比,具有统计学意义（P0.05）。结论:胃癌SGC-7901细胞成功被CD14过表达慢病毒载体转染。本研究中,转染CD14过表达慢病毒载体后,CD14 mRNA和蛋白质在胃癌细胞中过度表达。