腰腿痛胶囊对腰椎间盘突出症大鼠模型背根神经节中p38、p-p38、p65及IKKβ影响的实验研究

作     者：马理元 

作者单位：甘肃中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：姜劲挺

授予年度：2018年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：腰腿痛胶囊 腰椎间盘突出症 自体髓核移植 背根神经节 TNF-α p38 p-p38 p65 IKKβ 

摘      要：目的:通过观察腰腿痛胶囊对腰椎间盘突出症(Lumbar Disc Herniation,LDH)大鼠模型血清中TNF-α含量及背根神经节(Dorsal Root Ganglion,DRG)中p38、p-p38、p65及IKKβ表达水平的影响,探讨腰腿痛胶囊对腰椎间盘突出症的治疗机理,进一步明确LDH的发病机制。方法:选用SPF级雄性SD大鼠70只,随机分为七组,即:空白组、假手术组、模型组、FR(p38mapk)抑制剂组、腰腿痛胶囊组(中药组)低、中、高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组均制作自体髓核移植型腰椎间盘突出症大鼠模型。用自身前后对照法对各组进行热痛刺激缩爪阈值检测,以明确该药的镇痛作用;用ELISA法检测大鼠血清中TNF-α的含量;取L4-6节段的DRG,经HE染色后,观察大鼠DRG的结构形态的变化;采用免疫荧光染色法检测DRG中p38、p-p38、p65及IKKβ的表达量。结果:(1)造模后1天,除空白组大鼠外其余各组大鼠热痛刺激缩爪阈值均减小,与造模前1天的阈值比较,差异有统计学意义(P0.05);与造模后1天大鼠比较,造模后7天、14天,中药高、中、低剂量组和FR抑制剂组大鼠热痛刺激缩爪阈值呈增长趋势,以中药高、中剂量组和FR抑制剂组效果明显(P0.05);(2)空白组:DRG神经元细胞形态正常,细胞核位于中央,核仁明显,核膜清晰,胞质内充满细颗粒状物(尼氏小体),神经纤维排列整齐。模型组:DRG神经元细胞明显水肿,细胞核发生偏移,核膜模糊,细胞排列紊乱,细胞间隙增大,其周围卫星细胞增多,尼氏小体消亡减少,神经纤维排列混乱不清。假手术组、FR抑制剂组及中药组DRG结构形态均处于空白组和模型组之间,其中以FR抑制剂组和中药高剂量组DRG结构形态改善明显。(3)模型组大鼠血清中TNF-α含量较空白组大鼠明显升高,差异具有统计学差异(P0.05);与模型组大鼠比较,FR抑制剂组和中药低、中、高剂量组大鼠血清中TNF-α含量明显降低,差异具有统计学差异(P0.05);FR抑制剂组、中药高、中剂量组与中药低剂量组相比较,差异具有统计学差异(P0.05)。(4)模型组大鼠DRG中p38含量明显增加,与正常组比较存在显著差异(P0.05);与模型组比较,FR抑制剂组和中药高、中剂量组的差异均有统计学意义(P0.05);与中药低剂量组比较,中药高剂量组和FR抑制剂组的差异有统计学意义(P0.05)。模型组大鼠DRG中p-p38含量明显增加,与正常组比较存在显著差异(P0.05);与模型组比较,FR抑制剂组和中药高、中、低剂量组的差异均有统计学意义(P0.05);与中药低剂量组比较,中药中、高剂量组的差异均有统计学意义(P0.05)。模型组大鼠DRG中p65含量明显增加,与正常组比较存在显著差异(P0.05);与模型组比较,FR抑制剂组和中药高、中、低剂量组的差异均有统计学意义(P0.05);与中药低剂量组比较,FR抑制剂组和中药高、中剂量组的差异有统计学意义(P0.05)。模型组大鼠DRG中IKKβ含量明显增加,与正常组比较存在显著差异(P0.05);与模型组比较,FR抑制剂组和中药高剂量组的差异均有统计学意义(P0.05);与中药低剂量组比较,FR抑制剂组和中药高剂量组的差异有统计学意义(P0.05)。结论:(1)大鼠自体髓核移植后,后肢出现痛觉过敏,热痛刺激缩爪阈值明显下降,血清中TNF-α含量显著升高,DRG结构形态发生明显改变,成功建立自体髓核移植型LDH大鼠模型;(2)腰腿痛胶囊可能具有一定的抗炎镇痛作用,其抗炎作用可能是腰腿痛胶囊治疗LDH的机制之一;(3)腰腿痛胶囊对LDH大鼠模型DRG结构形态的改善,可能是其治疗LDH的机制之一;(4)免疫荧光检测结果说明:(1)腰腿痛胶囊对LDH的治疗机制可能是通过抑制p38MAPK信号通路和NF-κB信号通路的激活而实现的;(2)p38MAPK信号通路和NF-κB信号通路在LDH的发病机制中可能存在交互影响的关系。