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利妥昔单抗、依鲁替尼单药及联合对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株的增殖和凋亡影响

作     者:梁碧琦 

作者单位:广西医科大学 

学位级别:硕士

导师姓名:岑洪

授予年度:2017年

学科分类:1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题:利妥昔单抗 依鲁替尼 弥漫性大B细胞淋巴瘤 增殖抑制 凋亡 

摘      要:目的探讨利妥昔单抗和依鲁替尼单药以及两药联合在含有和不含有人补体条件下对弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)细胞株Farage的增殖和凋亡作用及其作用的可能机制。方法1.分别在含有和不含有人补体的条件下,采用CCK-8法检测不同浓度利妥昔单抗和依鲁替尼及两药联合对Farage细胞的增殖抑制率。2.采用流式细胞术检测利妥昔单抗在含有和不含有人补体的条件下对Farage细胞的凋亡率;采用流式细胞术检测依鲁替尼在含有人补体的条件下对Farage细胞的凋亡率,采用实时荧光定量PCR(Real Time PCR,RT-PCR)检测Survivin、Fas、Caspase-8、Caspase-3 mRNA表达水平,采用Western Blot检测Survivin、Caspase-3蛋白的表达水平。3.在含有人补体的条件下,采用流式细胞术检测利妥昔单抗联合依鲁替尼对Farage细胞的凋亡率,采用Western Blot法检测Survivin、Caspase-3蛋白表达变化。结果1.单药利妥昔单抗在不含有人补体的条件下(直接效应),不同药物浓度的利妥昔单抗对Farage细胞增殖抑制率和凋亡率的差异无统计学意义,P0.05;在含有人补体的条件下(补体依赖性细胞毒效应),对Farage细胞增殖抑制作用显著,呈浓度和时间依赖性,在含有和不含有补体的培养条件下的增殖抑制率差异有统计学意义,P0.05;10mmol/L依鲁替尼作用Farage细胞24 h后的早期凋亡率(5.49±0.42)%高于对照组(0.21±0.02)%,P0.05。4.在含有人补体的条件下,0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml利妥昔单抗分别联合2.5mmol/L、5mmol/L、10mmol/L依鲁替尼同时作用Farage细胞48 h后,两药联合的抑制率高于利妥昔单抗单药和依鲁替尼单药,差异均有统计学意义,P0.05;1mg/ml利妥昔单抗联合10mmol/L依鲁替尼同时作用Farage细胞24 h后,联合组的总凋亡率(44.3±2.20)%高于利妥昔单抗单药组(21.73±2.01)%和依鲁替尼单药组(17.44±1.60)%,;联合组的早期凋亡率(8.51±0.70)%高于利妥昔单抗单药组(2.81±0.40)%和依鲁替尼单药组(5.49±0.50)%;联合组的晚期凋亡率(35.82±2.10)%高于利妥昔单抗单药组(18.92±1.81)%和依鲁替尼单药组(11.95±1.02)%,差异均有统计学意义,P0.05。5.10mmol/L的依鲁替尼在含有人补体的条件下,作用Farage细胞12h后,Survivin mRNA相对表达量(0.55±0.11)低于对照组(1.00±0.00),Fas(1.63±0.15)、Caspase-8(1.90±0.20)、Caspase-3(2.20±0.20)mRNA相对表达量均高于对照组(1.00±0.00),差异均有统计学意义,P0.05;10mmol/L、15mmol/L的依鲁替尼作用Farage细胞12 h后,15mmol/L浓度组的Survivin蛋白表达量(0.410±0.052)低于10mmol/L浓度组(0.611±0.018),且两组均低于对照组(0.848±0.023),差异有统计学意义,P0.05,15mmol/L浓度组的Caspase-3蛋白表达量(0.949±0.046)高于10mmol/L浓度组(0.664±0.049),且两组均高于对照组(0.365±0.007),差异有统计学意义,P0.05。6.1mg/ml利妥昔单抗联合10mmol/L依鲁替尼在含有人补体的条件下,同时作用Farage细胞12 h后,联合组的Survivin蛋白表达量(0.416±0.0

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