毛郁金中等极性部位化学成分研究及倍半萜类化学成分的含量测定

作     者：王秋月 

作者单位：广西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：冯洁

授予年度：2017年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：毛郁金 化学成分 倍半萜 超高效液相-质谱 含量测定 

摘      要：目的:研究毛郁金中等极性部位的化学成分;建立超高效液相色谱-质谱联用方法(UPLC-MS)测定毛郁金中倍半萜类化合物的含量。方法:毛郁金根茎粉碎为粗粉,70%乙醇回流提取,提取物混悬于水,依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇萃取。乙酸乙酯部位经硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、ODS柱色谱、PTLC、高效液相半制备、重结晶等方法分离纯化。根据化合物的理化性质、波谱数据及与文献数据进行比对分析的方法鉴定化合物的结构。采用UPLC-MS法,测定毛郁金中莪术醇(CAW-2)、桂莪术内酯(CAW-3)、12-羟基莪术烯醇(CAW-6)、aromaticain A(CAL-1)、aerugidiol(CAW-7)5个倍半萜类化合物的含量。液相色谱条件为:Waters ACQUITY UPLC?HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm ID,1.8μm),甲醇(A)-水(B)(水相中加5 mmol/L甲酸铵)为流动相,进行梯度洗脱(0～5.5 min,40%A;5.5～8.5 min,40%A→65%A;8.5～12.5 min,65%A;12.5～15.5 min,65%A→80%A;15.5～18.5 min,80%A→95%A),流速为0.3 m L/min,柱温为40℃,进样量为10μL。质谱条件为:ESI离子源,莪术醇(CAW-2),桂莪术内酯(CAW-3),12-羟基莪术烯醇(CAW-6)、aromaticain A(CAL-1)在正离子模式下,aerugidiol(CAW-7)在负离子模式下,采用多反应离子监测(MRM)方式进行测定。结果:从毛郁金中等极性部位分离得到16个化合物,目前鉴定了其中的12个化合物,分别为β-谷甾醇(CAW-1),莪术醇(CAW-2),桂莪术内酯(CAW-3),methylzedoarondiol(CAW-5),12-羟基莪术烯醇(CAW-6),aerugidiol(CAW-7),2-羟基桂莪术内酯(CAW-8),zedoalactone B(CAW-11),wenyujinepoxide A(CAW-12),zedoalactone A(CAW-13),zedoalactone C(CAW-14),zedoarolide B(CAW-19)。其中化合物12-羟基莪术烯醇(CAW-6),2-羟基桂莪术内酯(CAW-8),zedoalactone B(CAW-11),wenyujinepoxide A(CAW-12),zedoalactone A(CAW-13),zedoalactone C(CAW-14),zedoarolide B(CAW-19)7个化合物为首次从该植物中分离得到。毛郁金倍半萜类化合物的含量测定,应用所建立的色谱条件:莪术醇(CAW-2)、桂莪术内酯(CAW-3)、12-羟基莪术烯醇(CAW-6)、aromaticain A(CAL-1)、aerugidiol(CAW-7)在18.5 min内能够进行定量分析,日间精密度和日内精密度均符合同步测定的要求。莪术醇在60～6000 ng/m L(r=0.9994)范围内,定量离子峰面积与其浓度呈良好的线性关系;桂莪术内酯在0.8～80 ng/m L(r=0.9998)范围内,定量离子峰面积与其浓度呈良好的线性关系;12-羟基莪术烯醇在52～5200 ng/m L(r=0.9997)范围内,定量离子峰面积与其浓度呈良好的线性关系;aromaticain A在340～17000ng/m L(r=0.9998)范围内,定量离子峰面积与其浓度呈良好的线性关系;aerugidiol在236～11800 ng/m L(r=0.9997)范围内,定量离子峰面积与其浓度呈良好的线性关系。莪术醇高、中、低三个浓度的平均加样回收率分别为99.7%,100.1%,99.0%,相应的RSD分别为0.69%,0.34%,0.62%;桂莪术内酯高、中、低三个浓度的平均加样回收率分别为97.0%,96.8%,100.0%,相应的RSD分别为0.42%,0.77%,0.14%;12-羟基莪术烯醇高、中、低三个浓度的平均加样回收率分别为100.8%,97.9%,99.0%,相应的RSD分别为0.74%,2.71%,0.58%;aromaticain A高、中、低三个浓度的平均加样回收率分别为99.4%,99.9%,100.3%,相应的RSD分别为0.11%,0.36%,0.47%;aerugidiol高、中、低三个浓度的平均加样回收率分别为99.7%,100.5%,100.2%,相应的RSD分别为0.29%,0.83%,0.38%。莪术醇、桂莪术内酯、12-羟基莪术烯醇、aromaticain A、aerugidiol的检测限分别为0.04 ng