A药治疗鼻炎的动物实验研究
作者单位：中南民族大学
学位级别：硕士
导师姓名：向梅先;戴康
授予年度：2016年
学科分类：1006[医学-中西医结合] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床]
摘 要：变应性鼻炎是耳鼻咽喉科常见的疾病之一,流行病学研究表明,变应性鼻炎的发病率在全球呈现出上升趋势。该疾病对患者生活、学习以及工作都有明显影响,特别是在睡眠、情绪及记忆方面,对合并有变应性鼻炎的哮喘患者,将导致其症状加剧,给患者造成巨大的痛苦和经济负担。在此背景下,对准确诊治变应性鼻炎的要求也日益提高,本课题选择A药为研究对象,它是纯中药制剂,可疏风清热、通鼻窍。临床上主要用于治疗急慢性鼻炎、变应性鼻炎和鼻窦炎等疾病,具有明显的疗效。目的:依据A药的功能主治,通过设计动物实验对该颗粒剂的安全性、主要药效学以及抗变应性鼻炎作用机制进行相关研究,为保证A药临床使用的安全、有效、合理,拟对其进行急性毒性、抗炎镇痛、抗菌、抗过敏反应等进行动物实验研究,从而对A药的安全性和有效性进行客观性评价,为开发出一个适用急慢性鼻炎、变应性鼻炎、鼻窦炎的医院制剂提供依据。方法:(1)安全性实验:选取30只小鼠随机分成对照组和给药组,分别观察各组小鼠的外观性状、行为活动、精神状态、呼吸和饮食情况,观察A药的急性毒性,同时测定出A药的最大剂量。(2)主要药效学实验:(1)镇痛作用:选用热板法和醋酸致小鼠扭体法观察A药的镇痛效果;(2)抗炎作用:选取二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型和角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型来研究A药对急性炎症的相关作用;选取大鼠棉球肉芽肿模型来探究A药对慢性炎症的效果;(3)选用脂多糖诱导小鼠急性肺损伤模型,研究A药对急性肺损伤小鼠的保护作用;(4)通过体内抗菌实验,观察A药抗菌作用。(3)抗变应性鼻炎的作用及作用机制:(1)建立豚鼠变应性鼻炎模型,观察其行为学特征,研究A药对致敏豚鼠的作用;(2)通过HE法染色法,观察鼻黏膜组织的炎性细胞浸润情况和组织水肿情况,探究A药对改善鼻黏膜组织病理表现的作用;(3)采用ELISA法测定血清中IL-4和SIgE含量,从而评价A药对炎症因子的影响作用;(4)通过免疫组化法检测鼻黏膜组织中TNF-α、SP、Bax以及VCAM-1的表达情况,研究A药对其表达的影响。结果:(1)安全性实验:A药的最大剂量为25 mg/g,实验过程中,各组小鼠的外观特征及行为活动均正常,呼吸均匀,精神状态及饮水饮食都未见异常,没有出现毒性反应。(2)药效学实验:(1)镇痛作用:A药高剂量(15.5 mg/g)在受到热刺激1h后可明显减轻疼痛到80.64%(p0.01),2h的镇痛百分率高达到91.09%(p0.01);A药中剂量(7.75 mg/g)和高剂量(15.5 mg/g)可明显减少小鼠扭体次数达42.85%(p0.05)和53.46%(p0.01);(2)抗炎作用:研究表明A药中剂量(7.75 mg/g,p0.05)和高剂量(15.5 mg/g,p0.01)可明显缓解小鼠的耳廓肿胀程度;A药高中低三个剂量(2.68 mg/g,5.35 mg/g,10.7 mg/g)抑制棉球导致的肉芽组织增生,抑制率分别为32.62%,45.13%(p0.01)和60.68%(p0.001);A药中剂量(5.35mg/g)和高剂量(10.7 mg/g)在注射角叉菜胶5h后可显著减轻大鼠足趾肿胀程度达34.8%(p0.05)和37.9%(p0.05);(3)A药的高剂量和中剂量可以有效降低急性肺损伤小鼠的肺干湿重,同时有效改善肺组织的组织水肿和炎性细胞浸润,表明A药可保护脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠;(4)抗菌作用:A药可保护感染金黄色葡萄球菌的小鼠,减少死亡率。(3)抗变应性鼻炎的作用及作用机制:(1)A药中剂量(7.75mg/g)和高剂量(15.5mg/g)可明显减少变应性鼻炎豚鼠的行为学表现,缓解动物鼻痒、喷嚏及流涕现象;(2)A药中剂量(7.75mg/g)和高剂量(15.5mg/g)可显著减少炎性细胞浸润情况和组织水肿面积,有效改善鼻黏膜组织病理变化;(3)A药中剂量(7.75mg/g)和高剂量(15.5mg/g)可显著降低变应性豚鼠血清中IL-4和SIgE含量,起到下调炎症因子的作用;(4)A药中剂量(7.75mg/g)和高剂量(15.5mg/g)可减少变应性豚鼠鼻黏膜组织中TNF-α、SP以及VCAM-1的表达,同时增强Bax表达。结论:(1)安全性实验:A药在25mg/g时未出现明显毒性反应,而且各组小鼠外观,行为,呼吸,精神状态以及饮食都是正常的。(2)药效学实验:(1)镇痛作用:表明A药具有明显的镇痛作用;(2)抗炎作用:A药具有较强的抗急性鼻炎和慢性鼻炎作用;(3)A药对急性肺损伤小鼠具有良好的保护作用;(4)抗菌作用:A药具有有效的体内抗菌作用。(3)抗变应性鼻炎的作用及作用机制:A药可有效抑制变应性鼻炎的作用,其作用机制与减少炎性介质(IL-4和SIgE)的释放,抑制肥大细胞脱颗粒,抑制炎细胞的粘附与浸润,抑制相关蛋白(TNF-α、SP以及VCAM-1)的表达,加速炎细胞(Bax)凋亡,调节机体免疫有关。
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