环形RNA hsacirc001988在结直肠癌中的表达及临床意义

作     者：王绪宁 

作者单位：中国人民解放军医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：郑伟

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：环形RNA 结直肠癌 肿瘤标志物 

摘      要：背景世界范围内,结直肠癌(CRC)是癌症相关疾病死亡的主要原因之一,是胃肠道常见的恶性肿瘤。2012年全世界约有140万结直肠癌新发病例,居恶性肿瘤第3位,给人们的健康构成了极大的威胁。但结直肠癌现有诊断指标的诊断效能有限,所以寻找新的肿瘤标记物,同时探索潜在生物治疗靶点有助于结直肠癌的诊治。随着二代测序技术和生物信息学的发展,环形RNA重新走入人们的视野,它是一类新型的非线性RNA,由前体RNA两侧的5’末端和3’末端反向剪切而成,构成闭合的环形。虽然环形RNA已经报道数十年,但是过去一度认为是拼接的副产物,并未引起科学家的兴趣。现在越来越多的研究发现环形RNA广泛地存在于真核细胞中,参与细胞的多种生物学功能,同时环形RNA参与了多种肿瘤的发生发展,其生物学作用也日益受到人们重视。基于此,我们对环形RNA在结直肠癌中的作用进行了初步探索。目的1、通过二代测序和生物信息学的方法预测结直肠癌患者肿瘤组织与癌旁正常组织中差异性表达的环形RNA,对部分差异明显的环形RNA进行PCR实验验证。2、对验证的环形RNA进行实时荧光定量PCR检测,比较肿瘤组织和癌旁组织中表达量是否存在差异。3、结合患者的各种临床信息进行单因素方差分析,探索目的环形RNA是否与临床因素有关。4、根据实时荧光定量PCR的数据,对目的环形RNA构建ROC曲线,探索差异性表达的环形RNA是否具有成为潜在诊断指标的可能。方法:1、选取2对样本(癌和癌旁)进行二代测序分析,应用生物信息学的方法比对预测出在癌组织和癌旁正常组织中差异性表达的环形RNA。设计引物通过PCR进行验证,应用实时荧光定量PCR的方法测定癌和癌旁组织的相对表达量。2、将癌和癌旁的数据进行统计分析,同时结合各种临床信息,找出目的环形RNA可能相关的临床因素。结果:1、通过二代测序以及数据分析筛出多条差异表达的环形RNA,其中甄选出环形RNAhsairc01988进行实验验证,证明环形RNAhsairc01988的存在。2、通过实时荧光定量PCR,发现环形RNAhsairc01988在癌和癌旁组织中表达是有差异的:癌组织中的表达量低于癌旁组织。3、对纳入的31例患者的临床信息进行统计分析发现环形RNA hsairc01988的表达量与肿瘤病理分化程度以及神经侵犯相关。4、构建 ROC 曲线(AUC= 0.788, 95%CI=0.68-0.90, P0.001)发现环形 RNA hsairc01988在结直肠癌中具有一定的诊断价值。结论:1、证实 了环形 RNAhsairc01988 的存在。环形 RNAhsairc01988 在结直肠癌和癌旁组织中表达是有差异的,在本研究中癌组织中的表达量低于癌旁组织。2、环形RNA hsairc01988可能参与肿瘤细胞的分化以及神经侵犯的生物学行为。3、环形RNA hsairc01988有潜力成为结直肠癌的新的肿瘤标记物和治疗的靶点。