川崎病急性期Th17细胞变化初探

作     者：贾实磊 

作者单位：遵义医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：李成荣

授予年度：2010年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

主      题：川崎病 细胞因子 Treg细胞 Th17细胞 

摘      要：川崎病急性期Th17细胞变化初探 目的探讨Th17/Treg细胞失衡在川崎病异常免疫反应发病机制中的作用及Th17细胞在静脉丙种球蛋白(IVIG)无反应型川崎病免疫发病机制中的作用。方法第一部分：我院为2007年2月-2009年2月住院川崎病(均为IVIG敏感型KD)患儿45例,正常同年龄对照20例。用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+Foxp3high调节性T细胞(Treg)及Th17细胞的表达。用CD4+T细胞免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞,采用实时荧光定量PCR (Real time-PCR)检测CD4+T细胞IL-17A/F、转录因子ROR-γt、Foxp3等mRNA变化;ELISA法检测血清IL-17A、IL-6、IL-10、TGF-β、IL-23蛋白水平。KD患儿分别于静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前后(KD组和KDIVIG组)取血备检。第二部分：我院2007年2月-2009年2月住院KD患儿45例,其中IVIG敏感型KD35例,IVIG无反应型KD10例,同年龄对照组(Ctrl组)20例。KD患儿分别于静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前后直接取血备检,IVIG无反应型KD再取三个时相取血备检(分别在病程第8、9、11天取血)。采用荧光定量PCR (Real-time PCR)检测CD4+T细胞IL-17A/F、转录因子ROR-γt mRNA表达;采用流式细胞术检测外周血Thl7细胞占CD4+T细胞比例。应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测Th17细胞相关的细胞因子(IL-17A和IL-6)的表达。结果1：Th17/Treg细胞失衡与急性期KD患儿的关系：(1)IL-17A/F表达与急性期KD患儿炎症指标正相关：比较分析急性期KD患儿IL-17A/IL-17F mRNA表达与血沉、CRP、WBC等炎症反应指标的关系,注意到IL-17A/IL-17F与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、白细胞数(WBC)呈正相关关系(P0.01)。(2)急性期KD患儿Th17/Treg细胞比值严重失衡：实验结果发现急性期KD患儿外周血Th17细胞比例、转录因子ROR-γt mRNA表达明显高于正常对照组(P0.05)。(3)急性期KD患儿治疗前IL-17A、IL-23和IL-6血浓度明显高于对照组(P0.01),KD-CAL+患儿明显高于KD-CAL-组(P0.05)。经治疗后IL-17A、IL-23及IL-6血浓度均有降低趋势。TGF-β亦较前有升高趋势。2：Thl7细胞及其相关因子细胞与IVIG无反应型KD的关系：(1)急性期KD患儿CD4+T细胞IL-17A/F表达明显高于对照组(P0.05)。(3)急性期KD患儿治疗前IL-17A和IL-6血浓度明显高于对照组(p0.01),其中IVIG无反应型KD活化细胞因子水平明显高于IVIG敏感型KD组(P0.01)。经治疗后均有下降趋势,但IVIG无反应型KD仍高于敏感型KD(P0.01)。(4)甲基强的松龙冲击治疗IVIG无反应型KD当天热即消退,血浆IL-6,IL-17A较前明显降低,CRP恢复快,能够迅速控制血管炎性反应。结论(1)急性期川崎病患儿Th17细胞过度活化、Treg细胞比例极度降低,Th17Treg细胞严重失衡,可能是导致KD患儿前炎症细胞因子异常增高的原因之一。(2)Th17细胞过度活化可能是导致KD对IVIG无反应的原因之一。