多种营养元素和强化大豆协同拮抗氟中毒雌鼠性腺轴损伤作用的研究
作者单位：贵州医科大学
学位级别：硕士
导师姓名：夏曙华
授予年度：2016年
摘 要：目的:探讨Ca、Mg、Cu、Zn、vitD和强化大豆干预燃煤型氟中毒对雌鼠性腺轴损伤作用及其可能机制。方法:1.以SD雌鼠为研究对象,采用自由食用织金病区原煤烘烤的玉米饲料喂养雌鼠以复制燃煤型氟中毒动物模型将其分为四组:对照组、染氟组、单独干预组、联合干预组,对照组给予正常饲料,染氟组给予100mg/kg染氟饲料,单独干预组在100mg/kg染氟饲料的基础上加入钙尔奇牌添佳片,联合干预组在100mg/kg染氟饲料的基础上同时加入钙尔奇牌添佳片和强化大豆;2.动态观察雌鼠染氟期间牙齿的变化情况;3.采用离子选择电极法、高温灰化-氟离子选择电极法测定雌鼠尿氟、骨氟含量;4.于不同时间段(60d、120d、180d)的动情期麻醉后处死雌鼠,采用股动脉取血法收集雌鼠血液,分离血清,电化学发光放射免疫法检测卵泡雌激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)、孕酮(P)及用ELISA法检测促性腺释放激素(GnRH)、抑制素(INH)的血清含量;5.(1)分离下丘脑、垂体、卵巢并称重,计算下丘脑、垂体、卵巢的脏器系数。(2)HE染色光镜下观察下丘脑、垂体、卵巢组织形态。(3)电镜下观察卵巢组织超微结构及颗粒细胞凋亡情况。结果:1.成功复制染氟组和干预组动物模型;2.除对照组外其余组均出现程度不同的氟斑牙,随时间的延长逐渐加重,氟斑牙情况两干预组较染氟组轻,联合干预组较单独干预组轻;3.在同一时间点(60d、120d、180d),染氟组雌鼠尿氟、骨氟含量均高于对照组(P0.05)外,其余均有统计学意义(P0.05);5.在光镜下,下丘脑和垂体组织未见明显的组织损伤,仅见轻微的组织水肿和间质血管充血;卵巢组织出现明显的病理损伤,染氟组随时间延长,卵泡颗粒细胞由轻度、中度、到重度呈现渐进性水肿的变化,细胞结构和细胞轮廓变得模糊,闭锁的卵泡和黄体退化逐渐增多,成熟卵泡偶见。两干预组卵泡颗粒细胞少见轻度水肿,细胞结构和细胞轮廓趋于正常,正常的各级卵泡多见,闭锁的卵泡和退化的黄体明显低于染氟组6.染氟组卵巢组织超微结构出现颗粒细胞、基质细胞凋亡;两干预组在早期仍可见较明显的超微结构损害,随干预时间延长,与染氟组比较,两干预组雌鼠卵泡颗粒细胞和基质细胞超微结构均基本正常,未见凋亡样改变。添加蛋白质后联合干预组脂滴明显少于单独干预组。7.(1)同一时间(60d、120d、180d)雌鼠血清gnrh、fsh、lh、t水平染氟组均高于对照组,除60d血清fsh水平染氟组略高于对照组无统计学意义(p0.05)外,其余有统计学意义(p0.05),120d、180d染氟组均高于两干预组,且两干预组与染氟组相比均有统计学意义(p0.05);随着时间的延长,对照组除血清fsh含量60d与180d相比和血清lh含量60d、120d与180d相比有统计学意义(p0.05);染氟组血清gnrh、fsh、lh、t水平均逐渐升高,除血清lh含量60d与120d相比和gnrh组内两两比较无统计学意义(p0.05)外,其余均有统计学意义(p0.05);联合干预组血清fsh、lh含量60d与180d相比和血清gnrh含量60d、120d与180d相比有统计学意义(p0.05)(2)60d、120d、180d血清p、inh水平染氟组均低于对照组,除染氟组血清p水平60d与对照组比较无统计学意义(p0.05)外,其余均有统计学意义(p0.05),120d、180d染氟组明显低于两干预组,且染氟组与两干预组相比均有统计学意义(p0.05)。随着时间的延长,血清p水平染氟组逐渐降低,除60d与120d和180d相比有统计学意义(p0.05)。血清INH含量染氟组逐渐降低,60d、120d与180d相比有统计学意义(P0.05),其他三组随时间的延长逐渐升高,对照组、单独干预组60d与180d有统计学意义(P0.05)其余各组两两比较差异均有统计学意义(P0.05),其余均有统计学意义(P0.05)。随着时间的推移E2的水平对照组由低到高再到低且60d与120d结果差异有统计学意义(P0.05)。染氟组E2结果由高逐渐降低结果有统计学意义(P0.05)。两干预组E2有逐渐降低的趋势,且60d与180d比较有统计学意义(P0.05)。结论:1.Ca、Mg、Cu、Zn、VitD等多种营养元素对氟毒性所致血清卵巢相关激素P、E2、INH降低和T的增高有明显的拮抗作用,且随干预时间延长,其相关激素水平逐渐趋于正常,对下丘脑分泌激素GnRH和垂体分泌激素FSH、LH的反馈作用减弱,血清GnRH、FSH、LH水平逐渐趋于正常。2.Ca、Mg、Cu、Zn、Vit D等多种营养元素协同干预氟中毒雌鼠卵巢病理损伤(卵泡生长发育、卵巢颗粒细胞和基质细胞超微结构)有明显的拮抗作用,且随干预时间延长,效果更佳。3.在Ca、Mg、Cu、Zn、Vit D的基础上添加强化大豆对氟中毒雌鼠血清LH、INH和卵巢病理损伤的拮抗作用更加明显,且随干预时间延长,效果更佳。
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