嗜肺军团菌抗原组分及γ干扰素抗其感染的研究

作     者：张兴虎 

作者单位：苏州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：诸葛洪祥;徐培君

授予年度：2005年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主      题：1型嗜肺军团菌 肺炎致病菌 共同抗原 免疫印迹 IFN-γ 

摘      要：目的 嗜肺军团菌的抗原组分与常见细菌性肺炎病原菌之间共同抗原的研究:观察IFN-γ增强豚鼠抗嗜肺军团菌感染的作用。 方法 制备1型嗜肺军团菌(LP1)菌体抗原,并用之多次免疫家兔,取其血清(多克隆抗体)作为抗体;提取LP1、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大肠杆菌的膜抗原;将抗原进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE);再把凝胶上的蛋白质转移到PVDF膜上;进行免疫印迹分析(Western-blot)。 将LP1经气管感染豚鼠,随机分成两组,治疗组和对照组,前者给予肌肉注射IFN-γ,后者肌肉注射PBS;每天观察两组豚鼠的一般体征;并于感染后的第24h、48、72h、120h和7d各处死4只,分别从腹主静脉抽血分离血清,检测CPK、GOT、GPT、AKP、BUN、Cr和LDH水平;取肺组织进行肺部菌落计数,并观察其肺病理改变。 结果 SDS-PAGE后的凝胶经考马斯亮染色显示,LP1膜抗原的主要条带位于154kDa、97kDa、79kDa、58kDa和44kDa处,其结果在Western-blot分析上得到了证实。Western-blot结果显示:约在154kDa和97kDa处表皮葡萄球菌、流感嗜血杆菌和铜绿假单胞菌泳道上同样可见清晰的条带;在79kDa处流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌泳道上也有清晰的条带;在58kDa处大肠杆菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯杆菌泳道上也可见有相应的条带;在44kDa处铜绿假单胞菌泳道上也有清晰的条带。金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌膜抗原未见任何条带出现。 IFN-γ治疗组动物感染的体征较轻,肺菌落数明显减少,部分感染动物的血清CPK、GOT、AKP、BUN、Cr和LDH水平明显降低,病理改变较对照组明显减轻。 结论 流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌和LP1间存在有三个共同的膜抗原表位;表皮葡萄球菌有两个,大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌只有一个。金黄色葡萄球和肺炎链球菌与