雷公藤对STZ诱导的1型糖尿病小鼠的疗效研究

作     者：马泽立 

作者单位：河南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李彦章

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：雷公藤 1型糖尿病 胰岛β细胞 血糖 胰岛素 胰岛素自身抗体 

摘      要：研究背景1型糖尿病(Type1 diabetes mellitus,T1DM),又称自身免疫性糖尿病,旧称青少年型糖尿病。现已少用此类称呼,因为过去我们对糖尿病的认识不足,常常将T1DM定位于儿童或青少年。T1DM患者大约占糖尿病病人总数的10%左右,根据2015年,国际糖尿病联合会(IDF)发布的调查数据,全世界约有54万2千个儿童患有1型糖尿病。糖尿病的主要危害是长期的高血糖所引起的血管及脏器损伤,造成患者患有一种或几种糖尿病的慢性并发症。常见的如心血管疾病[1]、糖尿病肾病[2]等,严重影响患者的生活质量甚至最终导致死亡[3]。与2型糖尿病的发病机制相比,T1DM的有很大的不同,根本上是由于自身免疫性疾病所导致。机制可能是由于自身免疫系统破坏了产生胰岛素的胰岛β细胞而引起,主要特点为胰岛素分泌的缺失,因此患者必须注射胰岛素,并且依赖终身。β细胞是胰岛细胞的重要构成部分,约占胰岛细胞的近80%。某些病毒会(如腮腺炎病毒、柯萨奇B4病毒或风疹病毒等)侵犯感染胰岛细胞,有些毒性化学物质(如吡甲硝苯脲,链脲佐菌素,四氧嘧啶等)也会对胰岛β细胞损伤,造成自身非免疫性损伤,或者因β细胞的破坏,释放出一些致敏蛋白从而引起自身免疫性的损伤(其中包括细胞免疫和体液免疫的共同参与),引发胰岛的自身免疫性炎症损伤和凋亡,导致胰岛β细胞的严重破坏。其中链脲佐菌素(STZ)是一项技术非常成熟的动物糖尿病模型建造试剂,对胰岛β细胞具有特异性的毒性杀伤作用[4]。多次中等剂量的注射的方法可以使啮齿类动物的β细胞大量较长时间的破坏,持续胰岛炎症反应,与人的T1DM发病过程较类似[5]。免疫抑制剂用于结缔组织病和自身免疫病等的治疗。雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook F)又名黄藤,是我国传统中草药。卫矛科雷公藤属植物,具有活血化瘀、清热解毒、消肿散结等功效[6],还具有抗炎、治疗神经性退化疾病等多种药理活性[7]。近年来在糖尿病肾病的领域中已有使用雷公藤制剂治疗的相关临床研究经验分享报告[8]。针对国内应用雷公藤多苷治疗糖尿病肾病的荟萃分析显示[9],雷公藤多苷能减少糖尿病肾病患者尿中的白蛋白含量,而对血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)则无明显影响。另有文献报道,雷公藤另一种活性成分:雷公藤甲素,可以通过激活凋亡蛋白酶Caspases,从而诱导外周t细胞的凋亡,而对胸腺细胞不产生影响[10]。另有研究发现,其还能有效地通过激活Caspase-3,而诱导有抗原提呈作用的树突状细胞(DC)凋亡[11]等从而起到抑制细胞免疫反应。对体液免疫的影响方面,Jianan Ren等研究表明雷公藤多苷可以有效使血清中的C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)明显减少[12]。杨帆等人研究发现雷公藤制剂能够通过抑制巨噬细胞产生白细胞介素-6(IL-6),而减轻炎症反应[13]。目的探讨雷公藤对STZ损伤的β细胞功能的影响。方法1.建立1型糖尿病小鼠实验模型健康8周龄C57BL/6小鼠在适应性喂养一周后进行随机分组。除对照组,STZ组和STZ+雷公藤组小鼠均进行STZ的注射造模。***+雷公藤组小鼠进行灌胃实验。STZ+雷公藤组每日上午9点行雷公藤药物灌胃治疗,其余两组行生理盐水灌胃做对照实验。3.小鼠的喂养、卫生监管及体重血糖等指标检测。每天检查小鼠的生活环境状况,如精神状态、饮食情况、运动程度、皮毛光泽等。并每周监测血糖、体重、饮食量等。实验结束时处死小鼠,分别收集血液和组织材料,妥善固定及冷冻。4.组织形态学观察将胰腺组织进行石蜡切片后经苏木精—伊红染色(Hematoxylin-eosin,HE)染色,在显微镜下观察胰岛细胞变化情况。5.用ELISA检测INS,IAA水平血液离心后,检测小鼠血浆上清液中胰岛素(INS)及胰岛素自身抗体(IAA)水平情况。结果1.与对照组小鼠相比,STZ组小鼠的体重明显减轻。2.经过6周的雷公藤灌胃治疗后,口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)测定血糖曲线下面积(area under the cure,AUC)显示,与STZ组相比,STZ+雷公藤组小鼠糖耐量明显改善。3.与对照组小鼠相比,STZ组INS明显减少,STZ+雷公藤组INS水平高于STZ组,而STZ+雷公藤组IAA水平低于STZ组。***染色显示,对照组胰岛细胞致密,排列有序,间隙小,胞质核仁饱满。STZ组胰岛皱缩,细胞排列紊乱有空泡,核致密,胞浆少。STZ+雷公藤组胰岛虽未有皱缩,但胰岛细胞较排列紊乱,存在空泡,细胞较稀疏。结论雷公藤对STZ诱导的1型糖尿病小鼠的胰岛细胞具有一定的保护作用,能使小鼠胰岛素自身抗体减少,减轻了自身免疫反应,从而使β细胞的破