shRNA表达质粒对柯萨奇病毒B3的抑制作用

作     者：耿媛 

作者单位：河北医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：金玉怀;王永祥

授予年度：2006年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主      题：RNA干扰 siRNA shRNA 柯萨奇病毒B3 质粒 

摘      要：目的:病毒性心肌炎及扩张性心肌病严重危害人类健康,发病率近十年来呈不断上升的趋势。柯萨奇病毒B组(coxsackievirus group B, CVB)是引起此类疾病的主要病原体,以CVB3最为常见。CVB3属于小核糖核酸病毒科,肠道病毒属,为无包膜的单链正股RNA病毒。基因组全长约7400bp,包含一个开放读码框(ORF)及其两侧的非翻译区(UTR)。病毒基因组本身具有mRNA活性,编码产生一系列病毒复制所需的结构和非结构蛋白,其中VP1-VP4组成病毒衣壳,P2A及P2C分别为病毒编码的蛋白酶[1,2]。近年来研究者从不同切入点对CVB3核酸、编码蛋白及致病的分子机制进行了大量探索,但目前应用各种抗病毒药物、疫苗以及反义寡核苷酸技术等防治方法均未取得满意效果。 1998年,Fire等[3]首先在线虫中发现,双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)分子可以引发序列特异性同源RNA降解,这种现象被称为RNA干扰(RNA interference, RNAi)。其机制为:dsRNA在胞浆内经Dicer(RNase-III家族的一种酶)切割产生长21-23nt的小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA);siRNA与多组相关蛋白结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-induced silence complex,RISC),以siRNA的一条单链为模板识别并切割与之互补的靶RNA,从而干扰靶RNA的表达。RNAi在进化上是一种古老的防御机制,广泛存在于真菌、植物、动物等多种生物体中[3],作为核酸水平的“免疫系统,