化浊解毒、活血通络方对血管性痴呆模型小鼠Ach、Caspase-3表达的影响

作     者：成晓燕 

作者单位：河北医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：田军彪

授予年度：2011年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：血管性痴呆 缺血再灌注 血清 Caspase-3 乙酰胆碱 认知功能 化浊解毒、活血通络方 

摘      要：目的:采用暂时阻断小鼠双侧颈总动脉加上尾端放血的方法制备有效的脑缺血导致的VD模型。用跳台实验和电迷宫测试VD模型小鼠的学习记忆等认知功能,利用酶联法检测小鼠血清中乙酰胆碱(Ach)含量的变化,用免疫组化法观察VD模型小鼠脑组织海马区Caspase-3表达变化,以此探讨化浊解毒、活血通络方对VD模型小鼠的治疗作用及可能机制。 方法:采用阻断小鼠双侧颈总动脉再通开,加上尾端放血的方法制备有效的脑缺血引起的VD模型。健康雄性昆明小鼠45只,随机均分为5组:模型组、化浊解毒、活血通络方高剂量组(以下简称“高剂量组)、化浊解毒、活血通络方低剂量组(以下简称“低剂量组)、尼莫地平对照组(以下简称“尼莫地平组)、假手术组,每组9只。前四组采用结扎双侧颈总动脉法暂时阻断血流,制造脑缺血再灌注模型,同时在距尾尖1cm处放血约0.3ml,热凝止血。假手术组小鼠只分离颈总动脉,穿线但不结扎,不断尾,不放血。手术造模成功后第2天开始分别给予治疗,同时正常、平等喂养。假手术组、模型组只需用生理盐水灌胃,尼莫地平组灌服尼莫地平液,中药高剂量组、低剂量组分别给予高、低剂量的化浊解毒,活血通络方灌服,均日服一次,连服15天。术后第7、15天时分别进行行为学测试(跳台实验、电迷宫实验),测试结束后摘取小鼠眼球取血,断头取出小鼠的脑组织,采用酶联法检测小鼠血清中Ach含量的变化,通过免疫组织化学方法检测小鼠脑组织海马区Caspase-3的表达变化。 结果: 1化浊解毒、活血通络方对VD模型小鼠认知功能的影响 1.1跳台实验成绩术后各阶段,模型组小鼠的反应时间比假手术组延长,错误次数增多,两组的差异有统计学意义(P0.05)。 2化浊解毒、活血通络方对VD模型小鼠血清中乙酰胆碱(Ach)含量的影响 模型组与假手术组比较,小鼠血清中Ach含量明显减少,差异具有统计学意义(P0.05)。给药组之间比较,高剂量组的Ach含量明显高于低剂量组,差异具有统计学意义(P0.05)。 3化浊解毒、活血通络方对VD模型小鼠脑组织海马区Caspase-3表达的影响 模型组、低剂量组在VD模型小鼠脑组织海马区各时间点均见大量Caspase-3活性细胞,且模型组与低剂量组之间比较无统计学意义(P0.05)。其中的Caspase-3活性细胞胞膜完整,胞体呈椭圆形或梭形,胞浆呈棕黄色染色,并由胞体伸出少量较短突起,未见明显分支。高剂量组只可见少量的Caspase-3活性细胞,明显低于模型组和低剂量组,并且差异具有统计学意义(P0.05)。 结论 1化浊解毒、活血通络方可以提高VD模型小鼠的跳台实验与电迷宫实验的成绩,改善其认知功能。 2化浊解毒、活血通络方可以升高VD模型小鼠血清中的Ach含量,具有改善学习记忆的功能。 3化浊解毒、活血通络方可抑制小鼠脑组织海马区Caspase-3的表达,减少VD模型小鼠脑组织神经元的凋亡。 4提高小鼠血清中Ach的含量,抑制脑组织海马区Caspase-3的表达可能是化浊解毒、活血通络方对VD模型小鼠的治疗机理之一。