红花总黄酮提取纯化及体外抗动脉粥样硬化药效活性评价

作     者：玛依努尔·叶尔肯别克 

作者单位：新疆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：武嘉林

授予年度：2014年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：红花总黄酮 提取纯化工艺 动脉粥样硬化 巨噬源性泡沫细胞 

摘      要：目的：本研究以红花主要有效成分红花总黄酮为研究对象,考察了其最佳提取纯化工艺并进行了体外抗动脉粥样硬化药效活性评价,为红花制剂的进一步研究和临床应用提供依据。方法：1.提取工艺建立了以芦丁为对照品的紫外-可见分光光度法和以羟基红花黄色素A为标准品的HPLC法相结合的更适合红花总黄酮的含量测定方法,以总黄酮提取量为指标,探讨了不同提取方法对提取效果影响,单因素考察了提取溶剂、提取时间等因素,并采用正交试验方法考察了不同因素对提取结果影响,得到了较优提取工艺。2.纯化工艺以红花总黄酮吸附率与解析率为指标,考察4种不同型号的大孔树脂对红花总黄酮的吸附与解析能力,确定AB-8为最佳树脂,并对AB-8大孔树脂的纯化条件进行优化。3.红花总黄酮体外药效试验建立小鼠腹腔巨噬细胞源性泡沫细胞模型,用氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导小鼠腹腔巨噬细胞建立泡沫细胞,胆固醇酯比总胆固醇值大于50%时说明形成泡沫细胞,再加入红花总黄酮高中低药物组,阳性对照羟基红花黄色素A组,培养48h,冰浴超声破碎细胞用总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)试剂盒进行检测,观察其对泡沫细胞的药效作用,为红花总黄酮对早期动脉粥样硬化(AS)作用研究提供一定依据。结果：1.含量测定结果显示红花总黄酮在0.0104mg·mL-1～0.0299mg·mL-1范围内线性关系较好,r=0.9995,平均加样回收率为104%,RSD为2.82%;羟基黄花黄色素A在5-35μ***-1范围内线性关系较好,r=0.9996,并确定其最佳提取工艺为60倍水在60℃下浸泡提取两次,每次100min。2.最佳纯化工艺为AB-8型大孔树脂对红花总黄酮的吸附条件是上样浓度为0.9g·mL-1,上样流速为2mL·min-1,最佳上样量为5/8BV,静态吸附时间为60min,用7BV50%乙醇以1mL·min-1流速的洗脱。3.羟A、红花中剂量具有明显的抑制泡沫形成作用(P0.05),且与模型组比具有统计学意义。结论：红花总黄酮提取纯化工艺稳定、简便、可行。并具有一定的抗早期动脉粥样硬化作用。