熊果酸经ROCK/PPAR-γ/CXCL16信号通路对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

作     者：孔德新 

作者单位：青岛大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王春波;韩彦弢

授予年度：2016年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：熊果酸 高氧化程度的氧化型低密度脂蛋白 内皮细胞 ROCK/PPAR-γ/CXCL16 

摘      要：目的:复制高氧化程度的氧化型低密度脂蛋白(High ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤病理模型,证明熊果酸(UA)经ROCK/PPAR-γ/CXCL16信号通路保护血管内皮细胞。方法:以HUVECs为受试对象,筛选确定High ox-LDL的最佳造模浓度(24h)。实验设计为:正常组、High ox-LDL组、UA+High ox-LDL组、ROCK特异性抑制剂(Y27632)组、Y27632+High ox-LDL组、UA+Y27632+High ox-LDL组、PPAR-γ特异性激活剂(罗格列酮)组、罗格列酮+High ox-LDL组、UA+罗格列酮+High ox-LDL组、PPAR-γ特异性抑制剂(GW9662组)、GW9662+High ox-LDL组、UA+GW9662+High ox-LDL组。采用CCK8法检测各组细胞的存活率;应用分子生物学技术,检测不同处理组中ROCK磷酸化水平(p-ROCK/ROCK非磷酸化)以及PPAR-γ、CXCL16在m RNA和蛋白水平的表达,并运用特异性抑制剂/激活剂证明其级联关系;Amplite ROS Green法测定细胞内ROS含量;并采用SPSS17.0软件统计分析。结果:35μg/ml High ox-LDL成功复制损伤模型,此时胞内ROS是正常组的2.4倍,p-ROCK/ROCK(非磷酸化)比值升高,CXCL16 m RNA表达上调,PPAR-γm RNA表达显著降低,且PPAR-γ与CXCL16在蛋白水平的表达与m RNA水平相一致,差异有统计学意义(P0.05);GW9662拮抗UA对CXCL16以及ROS的下调,使二者生成均升高(P0.05);UA可能通过负调控ROCK/PPAR-γ/CXCL16的激活发挥抗损伤的作用。结论:35μg/ml的High ox-LDL成功复制体外氧化损伤模型,发现外源性的High ox-LDL能诱导HUVECs中CXCL16的高表达;UA可能通过下调ROCK/PPAR-γ/CXCL16信号通路,维稳血管内皮。