超声空化效应促人骨髓间充质干细胞体内归巢的实验研究

作     者：袁钰祺 

作者单位：青岛大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王英振

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：骨髓间充质干细胞 环氧化酶2 胰岛素样生长因子1 慢病毒 关节炎 超声 微泡 空化效应 移植 

摘      要：第一部分骨髓间充质干细胞中环氧化酶2及聚蛋白多糖酶1沉默与胰岛素样生长因子1表达【目的】观察携带基因环氧化酶2、聚蛋白多糖酶1的sh RNA干扰载体和携带胰岛素样生长因子1的过表达慢病毒载体在骨髓间充质干细胞中的表达情况。【方法】应用重组慢病毒技术构建携带沉默基因环氧化酶2、聚蛋白多糖酶1、过表达基因胰岛素样生长因子1和绿色荧光蛋白基因的重组慢病毒表达载体,并用其转染体外培养的第三代人骨髓间充质干细胞(实验组),并以无目的基因的慢病毒载体转染人骨髓间充质干细胞和未做处理的人骨髓间充质干细胞分别作为阴性对照组和空白组进行对比。【结果】慢病毒转染3d后,荧光显微镜下可见人骨髓间充质干细胞发出绿色荧光,阴性对照组、实验组转染效率均达90%以上。RT-PCR、Western blot和ELISA检测结果显示,环氧化酶2和聚蛋白多糖酶1在人骨髓间充质干细胞的基因和蛋白水平有受到了明显抑制,胰岛素样生长因子1基因和蛋白水平的表达均高于阴性对照组及空白组。【结论】应用慢病毒可在人骨髓间充质干细胞成功沉默环氧化酶2和聚蛋白多糖酶1基因,同时将胰岛素样生长因子1高表达,为系统性治疗类风湿性关节炎带来新的希望。第二部分超声空化效应促人骨髓间充质干细胞体内归巢的实验研究【目的】研究观察超声空化效应对慢病毒介导h COX-2 sh RNA、h Aggrecanse-1sh RNA、h IGF-1基因转染人骨髓间充质干细胞移植的可行性及干细胞在兔关节炎模型体内归巢的影响。【方法】关节炎模型造模成功的新西兰兔分为3组:转染基因人骨髓间充质干细胞+微泡+超声组(实验组)、转染基因人骨髓间充质干细胞+超声组(对照组)、转染基因人骨髓间充质干细胞+无处理组(空白组),移植细胞后检测兔后肢膝关节滑膜组织学观察及RT-PCR基因检测。【结果】超声空化效应可以增加慢病毒介导h COX-2 sh RNA、h Aggrecanse-1sh RNA、h IGF-1基因转染人骨髓间充质干细胞在兔关节炎模型进入靶器官的比例。【结论】为临床应用骨髓间充质干细胞治疗遗传免疫性疾病提供了有效途径及实验基础。