赛来昔布对食管鳞癌Eca-109细胞放射敏感性的影响

作     者：豆道勤 

作者单位：汕头大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈志坚

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：食管肿瘤 氧化还原酶类 放射敏感性 鳞状细胞 环氧化酶抑制剂 

摘      要：背景和目的 食管癌是原发于食管黏膜上皮的恶性肿瘤。全世界每年约30万人死于食管癌,约2/3的患者在确诊时已处于局部晚期或已有远处转移而无法手术,此时放射治疗或放化疗综合治疗是主要的治疗手段,但5年生存率徘徊在10%～20%,因此,如何进一步提高放疗疗效是临床工作中的一个重要问题。近年来,人们采用各种各样的方法如改变照射方式、应用重粒子射线、应用放射增敏剂等以期放疗疗效的进一步提高。其中放射增敏剂作为提高疗效的一个重要途径,成为研究热点。有研究表明,诱导型环氧合酶-2（cyclooxygenase-2）在食管肿瘤发生的各个阶段均有表达,并且可能和较差的预后有关。流行病学调查表明服用COX非选择性抑制剂阿司匹林能够降低食管肿瘤的发生率。同时有研究显示,COX-2蛋白表达水平与肿瘤放射敏感性相关,提示COX-2抑制剂可能增强射线的细胞杀伤效应,其确切机制尚不明确。本实验主要研究COX-2抑制剂赛来昔布对食管鳞癌Eca-109细胞的放射敏感性的影响,并初步探讨其增敏机制。 方法 1.细胞爬片免疫组化的方法了解Eca-109细胞COX-2蛋白表达情况。 2. MTT实验测定不同浓度（75、100、125、150、175、200μmol/L）赛来昔布对Eca-109细胞的生长抑制作用。 3. 100μmol/L和125μmol/L赛来昔布作用Eca-109细胞24h给予不同剂量（0、1、2、4、6Gy）X线照射后,应用克隆形成实验检测赛来昔布的放射增敏作用。 4.流式细胞仪（FCM）分析100μmol/L赛来昔布及6Gy照射单独及联合作用对Eca-109细胞凋亡率的影响。 5. Western-blot检测5Gy、10Gy照射后Eca-109细胞COX-2蛋白含量变化。 结果 1. Eca-109细胞胞浆COX-2蛋白阳性表达。 2.赛来昔布对Eca-109细胞的生长抑制作用:75～200μmol/L赛来昔布作用Eca-109细胞24、48和72h后,可抑制细胞生长,且对细胞的生长抑制作用具有时间和浓度依赖性（r=0.801～0.981, P0.05或P0.01）,100μmol/L、125μmol/L赛来昔布作用24h细胞增殖抑制率分别为12.1%和14.6%。赛来昔布作用24h时IC15=108.50±2.05μmol/L。 3.赛来昔布对Eca-109细胞放射敏感性的影响:单纯照射组、100μmol/L+照射组、125μmol/L+照射组的D0值分别为1.38、1.34、1.14,Dq值分别为1.60、1.01、0.50。100μmol/L和125μmol/L由D0计算增敏比分别为1.03和1.21,由Dq计算增敏比分别为1.58和3.20。100μmol/L赛来昔布使2Gy照射时Eca-109细胞的存活分数由0.57降至0.42,125μmol/L赛来昔布可使之降至0.25。 4.赛来昔布和放射对Eca-109细胞凋亡率的影响:100μmol/L赛来昔布和6Gy照射后24hEca-109细胞的凋亡率分别是（3.28±0.89）%和（15.05±0.79）%。100μmol/L赛来昔布诱导Eca-109细胞凋亡作用较弱,但明显增强6Gy X线的诱导凋亡作用,联合组凋亡率达（30.32±0.87）%,与100μmol/L组和6Gy组的算术和（18.33±1.68）%相比,P=0.0160.05,提示赛来昔布与放射相加,二者具有协同作用,能明显增强放射诱导的细胞凋亡。 5.照射后Eca-109细胞COX-2蛋白表达未出现明显变化。 结论 1. Eca-109细胞胞浆COX-2蛋白阳性表达。 2.赛来昔布能够抑制Eca-109细胞的生长,抑制作用有时间和浓度依赖性。 3.赛来昔布能够增强Eca-109细胞的放射敏感性,其机理可能同减少细胞的亚致死性损伤修复和增强放射诱导的细胞凋亡有关。 4.照射后Eca-109细胞COX-2蛋白表达未出现明显变化。