白藜芦醇对膀胱癌T24细胞的作用及其机制的实验研究

作     者：路艳红 

作者单位：河北医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李永军

授予年度：2011年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：白藜芦醇 T24细胞 PTEN基因 凋亡 基因治疗 

摘      要：目的:近年来生物治疗成为肿瘤治疗的一种新模式,其中基因治疗是肿瘤生物治疗的热点,其中通过药物对肿瘤相关基因的调控也逐渐引起大家的关注,膀胱癌是严重影响人类健康的疾病之一。本研究从细胞分子水平研究白藜芦醇对人膀胱癌细胞株T24增殖及凋亡的影响作用,并进一步探讨白藜芦醇对膀胱癌细胞的作用机制,为膀胱癌的治疗寻找新的有效药物。 方法: 1采用MTT法分析不同浓度白藜芦醇对T24细胞作用不同时间后,观察白藜芦醇对T24细胞株增殖反应的影响。 2用不同浓度白藜芦醇分别处理T24细胞48h后,采用瑞吉染色技术光学显微镜、透射电镜观察细胞的形态学变化。 3用不同浓度白藜芦醇分别处理T24细胞48h后,利用流式细胞技术检测细胞的周期分布和凋亡情况。 4采用半定量RT-PCR分析不同浓度白藜芦醇作用T24细胞48h后PTEN mRNA的表达水平的变化。 结果: 1 MTT分析结果:与对照组相比,不同浓度的白藜芦醇作用于T24细胞24h、48h、72h后,对细胞的增殖反应均有明显抑制作用(P0.01),并呈时间、剂量效应关系,各浓度24h、48h、72h的抑制率(均值)如下:12.5μmol/L依次为2.8%,7.6%,14.4%;25μmol/L依次为11.3%,27.3%,39.6%;50μmol/L依次为18.3%,31.3%,42.4%;100μmol/L依次为26.2%,40.1%,65.8%;200μmol/L依次为33.2%,53.6%,72.5%;药物浓度越大,作用的时间越长,抑制效应越明显,白藜芦醇对T24细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性。 2形态学变化:透射电子显微镜和瑞吉染色后光镜观察发现白藜芦醇作用于肿瘤细胞后,可诱导典型的细胞凋亡形态的变化和超微结构改变,如部分细胞膜向外呈球形膨出;核染色质浓缩,体积缩小,电子密度增加,边集于核膜下,厚薄不均匀;核碎裂,核膜破裂,核质溢出到细胞质内,形成许多核碎片。倒置显微镜下观察到白藜芦醇作用后细胞生长明显被抑制,细胞体积缩小,胞质空泡变性,部分细胞变圆悬浮在培养基中,胞浆内可见颗粒增多增粗。 3流式细胞术检测结果:白藜芦醇处理T24细胞后,使G0/G1期细胞比例增加,50μmol/L及100μmol/L分别增加至50.33%和83.00%,与空白对照组的34.75%相比,具有显著性差异(P0.01)。S期和G2期细胞比例下降,凋亡率明显增加,50μmol/L和100μmol/L白藜芦醇作用T24细胞48h后,使细胞凋亡率分别达到3.85%、13.86%,与空白对照组的1.67%相比,差异同样具有显著性(P0.01)。且随浓度增加,G0/G1期细胞比例增多,凋亡率也随之升高,不同浓度间比较差异也具有统计学意义(P0.01)。 4半定量RT-PCR结果显示白藜芦醇能使PTEN mRNA的表达上调,且随着药物浓度增加,PTENmRNA的表达逐渐增强,呈浓度依赖性。实验组与空白对照组比较以及不同浓度间比较,PTENmRNA的表达差异均具有显著性(P0.01)。 结论: 1白藜芦醇在体外能明显抑制膀胱癌细胞T24增殖。 2白藜芦醇对食管癌细胞T24细胞的抑制作用可能与其能诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期于G0/G1期有关。 3白藜芦醇的抗癌作用还可能与其能上调抑癌基因PTEN的表达水平有关。