PRP对RA-FLS细胞迁移和侵袭的影响

作     者：严姗姗 

作者单位：扬州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张育

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：富血小板血浆 类风湿关节炎滑膜成纤维细胞 迁移 侵袭 

摘      要：研究背景和目的：富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)是一种含有大量血小板和各种生长因子的自体血浆。当PPR被凝血酶、氯化钙激活后,PRP中的α颗粒经脱颗粒的方式,释放出大量的生长因子,包括血小板衍生生长因子(Platelet-derived growth factor, PDGF)、转化生长因子(Transforming growth factor-β, TGF-β)、血管内皮生长因了(Vascular endothelial growth factor, VEGF)和胰岛素样生长因子(Insulin-like growth factor, IGF)等,而这些生长因子在细胞的增殖、分化、骨质产生、软组织愈合和胶原合成等方面起着重要的作用。类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是一类以炎性细胞浸润和滑膜增生为特点,最终导致关节的破坏和畸形的慢性自身免疫性疾病。滑膜样成纤维细胞(Fibroblast-like synovial cells, FLS)在RA的发生和发展过程中起着重要的作用,RA-FLS能够粘附细胞外基质,分泌金属基质蛋白酶,迁移、侵袭至关节软骨,造成关节的破坏。有研究报道血小板数目的增多和RA的疾病活动度相关,本文在主要目的是探讨PRP对RA-FLS迁移和侵袭的影响。方法：1.利用凝血酶和氯化钙活化PRP,离心后取上清用于实验;2.利用划痕实验、transwell细胞迁移和侵袭实验研究PRP对RA-FLS细胞迁移和侵袭的影响;3. 利用RA-FLS与I型胶原粘附实验研究PRP对RA-FLS与细胞外基质(extracellular matrix, ECM)粘附的影响;4.利用免疫荧光实验观察PRP对RA-FLS细胞肌动蛋白细胞骨架重排、丝状和片状伪足形成的影响;5. 利用RT-qPCR检测PRP作用后RA-FLS细胞中MMPs的mRNA的表达。结果：1.划痕实验显示PRP能够促进RA-FLS细胞的迁移;Transwell细胞迁移实验结果显示,相较于NC组,2%PRP和5%PRP组穿过小室的相对细胞数分别为2.02±0.78,2.59±0.90(P0.05)。2. Transwe 11细胞侵袭实验结果显示,相较于NC组,2%PRP和5%PRP组的细胞穿越Matrigel屏障的相对细胞数分别为1.50±0.22,2.68±0.35(P0.05)。3. RA-FLS细胞与I型胶原粘附实验显示,相较于NC组,2%PRP和5%PRP组的细胞粘附于I型胶原的相对细胞数分别为1.50±0.27,1.87±0.62(P0.05)。4.免疫荧光实验结果显示,PRP能够促进RA-FLS细胞骨架的重排,板状伪足和丝状伪足增多,张力纤维减少。5. RT-qPCR显示PRP能够促进RA-FLS上调MMP-1、MMP-3、MMP-10的mRNA的表达。结论：1.PRP促进RA-FLS细胞的迁移、侵袭和粘附;2.PRP可能通过调控RA-FLS细胞肌动蛋白骨架纤维的重排、上调MMP-1、MMP-3和MMP-10 mRNA的表达来实现其促进迁移、侵袭和黏附作用的