二烯丙基二硫对高表达cofilin1白血病HL-60细胞分化的影响

作     者：雷艳萍 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：苏琦

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：二烯丙基二硫 cofilin1 细胞转染 HL-60细胞 分化 

摘      要：目的：研究二烯丙基二硫(DADS)对人白血病HL-60细胞中cofilin1表达以及其增殖、迁移、侵袭与分化的影响，并探讨其作用的分子机制。 方法：RT-PCR和Western blot检测DADS对HL-60细胞中的cofilin1及p-cofilin1表达的影响以及信号通路Rac1-ROCK1-LIMK1中各因子表达的改变。通过细胞转染技术，将高表达cofilin1基因的重组质粒pcDNA3.1-CFL1-IRES2-EGFP稳定转染HL-60细胞，构建高表达cofilin1的HL-60/pcDNA3.1/cofilin1-EGFP细胞系。RT-PCR和Western blot检测转染后HL-60细胞cofilin1表达的变化，并观察DADS对高表达cofilin1的HL-60细胞中cofilin1表达的影响;NBT细胞还原实验、CCK-8增殖检测实验、Transwell迁移和侵袭实验以及细胞免疫荧光观察DADS对HL-60细胞及高表达cofilin1的HL-60细胞生物学特性的影响;RT-PCR和Western blot检测DADS对高表达cofilin1的HL-60细胞Rac1-ROCK1-LIMK1信号通路的影响。 结果： 1. DADS对HL-60细胞的cofilin1表达的影响 RT-PCR和Western blot显示，DADS作用HL-60细胞0h、6h、12h、24h、48h后，cofilin1和p-cofilin1在mRNA表达水平和蛋白表达水平表现为时间依赖性的下降(P0.05)。 3. DADS对高表达cofilin1的HL-60细胞中cofilin1表达的影响 构建高表达cofilin1的真核表达载体pcDNA3.1-CFL1-IRES2-EGFP，稳定转染HL-60细胞，RT-PCR和Western blot显示，转染cofilin1的高表达载体的后，HL-60细胞中cofilin1mRNA和蛋白表达水平与未转染组及阴性转染组细胞比较明显上升，表明HL-60/pcDNA3.1/cofilin1-EGFP细胞系构建成功。 RT-PCR与Western blot显示，DADS处理前后，未转染组、阴性转染组及高表达组细胞的cofilin1和p-cofilin1在mRNA和蛋白表达水平具有统计学差异(P0.05)。 CCK-8实验结果显示，DADS处理后，未转染组、阴性转染组及高表达组细胞的增殖能力较未处理的各组均减弱，且未转染组和阴性转染组细胞较高表达组细胞的增殖抑制更明显(P0.05)。表明高表达cofilin1可以减弱DADS对HL-60细胞的增殖抑制作用。 Transwell迁移和侵袭实验结果显示，DADS分别处理未转染组、阴性转染组及高表达组细胞后，其细胞穿过膜和基质胶的数量较未处理的各组细胞均减小(P0.05)。表明高表达cofilin1可以减弱DADS对HL-60细胞的迁移、侵袭抑制作用。 细胞免疫荧光结果显示，DADS处理后，未转染组、阴性转染组及高表达组细胞的CD11b蛋白表达水平较未处理的各组明显上升，CD33蛋白表达水平较未处理的各组明显下调。 5. DADS对HL-60细胞中的Rac1-ROCK1-LIMK1信号通路的影响 RT-PCR和Western blot结果显示，DADS作用HL-60细胞0h、6h、12h、24h、48h后，Rac1、ROCK1、LIMK1及p-LIMK1的mRNA和蛋白表达水平表