基于CD4立体构型设计的小分子免疫抑制剂的生物学评价

作     者：张静蕊 

作者单位：中国人民解放军军事医学科学院 

学位级别：硕士

导师姓名：沈倍奋

授予年度：2004年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：免疫抑制剂 移植排斥反应 自身免疫性疾病 混合淋巴细胞培养 细胞黏附 

摘      要：国外在八十多年前已开始研究免疫抑制剂，但因为特异性差，有明显副作用， 所以临床效果不甚理想。李松教授根据CD4的立体构型，运用计算机辅助设计 方法，获得了一些小分子非肽类免疫抑制剂，可以特异性阻断CD4与MHC-Ⅱ 类分子β2的结合，但其体内外生物学效应还有待进一步研究。 本研究先从李松教授提供的51种小分子有机化合物中，初步筛选出3种具 有特异性免疫抑制作用的小分子有机化合物，继而分别在细胞水平、分子水平和 基因水平上探讨它们的作用机理，为临床上防治移植排斥反应和自身免疫性疾病 提供有效手段。 一．有免疫抑制作用的化合物的确定 应用MTT法和3H-TdR掺入法，分别通过细胞系和人外周血，观察这51种 化合物对混合淋巴细胞培养的影响，初步评价它们是否具有免疫抑制作用。结果 70％的化合物具有免疫抑制作用，从中挑选3种具有明显免疫抑制作用的化合物 D2、 J2和N2，对其作用机理进行进一步研究。 二．小分子免疫抑制剂的作用机理研究 1． 对细胞黏附作用的影响 利用肖鹤博士建立的HEK293／CD4细胞(表达CD4膜蛋白，并含有绿色荧 光蛋白)和本室现有的高表达MHC-Ⅱ类分子的细胞--Daudi细胞(用红色荧 光染料染色)，使这两种细胞相互作用，在体外模拟CD4与MHC-Ⅱ类分子的相 互作用，结果3种小分子化合物可以明显抑制两种细胞间的黏附。 2． 对细胞因子产生的影响 CD4+T细胞受到刺激后活化，产生IL-2和IFN-γ等细胞因子，鉴于此， 用PMA和ionomycin刺激人PBMC活化，使其产生IL-2和IFN-γ，经流式细 硕士论文 中文摘要 胞仪分析表明，3种小分子化合物普遍抑制了几一2的产生，而对正N一Y的产生 影响不大。 3.对NF沪汀核因子表达的影响 T细胞激活后，IL一2转录升高，而几一2增强子含有多个N下一AT结合位点， 提示NF一AT的表达与IL一2的表达呈正相关。为了进一步证明T细胞激活，将人 PBMC用PMA和ionomyCin刺激的同时加入3种小分子化合物，将提取到的核 蛋白与合成的NF一AT探针结合，进行凝胶阻滞电泳分析，检测小分子化合物对 NF一AT核因子的影响，结果它们对NF一AT核因子的表达有不同程度的抑制。 本文的研究初步表明，基于CD4立体构型设计的小分子免疫抑制剂具有一 定的免疫抑制作用，有可能为临床上防治移植排斥反应和自身免疫性疾病提供新 型治疗手段。