GPR137基因沉默对人脑胶质瘤细胞增殖，克隆和周期的实验研究

作     者：宗钢 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：赵兵

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：GPR137 神经胶质瘤 细胞增殖 克隆形成 周期分布 

摘      要：目的利用RNA干扰（RNAi）技术沉默GPR137基因在多种恶性胶质瘤细胞中的表达，阐明GPR137对恶性胶质瘤细胞增殖、克隆形成能力等方面的影响。 方法利用免疫组化技术对29例不同级别人胶质瘤组织中GPR137的表达及与病理分级相关性进行分析。利用半定量反转录－聚合酶链反应（semi-quantitative RT-PCR）检测GPR137基因在五种恶性胶质瘤细胞（U251,U-87MG, U-118MG, A172,U373）中的表达。构建针对GPR137基因的短发卡(shRNA)慢病毒表达载体，包装成病毒颗粒并感染人胶质瘤U251和A172细胞，采用实时定量聚合酶链反应和Western印迹法验证GPR137基因的mRNA和蛋白的表达，确定其抑制效率。采用噻唑蓝(MTT)比色法和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力情况，应用流式细胞分析法检测细胞周期分布情况。观察沉默GPR137基因对U251和A172细胞增殖、克隆形成和周期分布的影响。 结果不同级别人胶质瘤组织中GPR137表达均异常上调，且与胶质瘤临床病理分级呈正相关。通过半定量反转录－聚合酶链反应证实，GPR137基因在五种胶质瘤细胞中均显著表达。实时定量聚合酶链反应和Western印迹法显示，GPR137-shRNA能有效抑制U251和A172细胞中GPR137基因的mRNA和蛋白的表达。MTT和克隆形成实验显示，感染后的胶质瘤细胞的增殖和克隆形成能力明显受到抑制。流式细胞分析法显示，感染后的胶质瘤细胞周期停滞在S期。上述差异均具有统计学意义﹙P0.05﹚。 讨论以往的文献已经证实信号转导通路和相关的膜蛋白，特别是G蛋白偶联受体(GPCRs)家族在胶质瘤的形成中发挥着重要的作用。肿瘤细胞通过G蛋白偶联受体得以存活、增殖、侵犯周围组织、并躲避免疫机制。人体内已知的800多种G蛋白偶联受体大部分已经明确其结构和功能，并成为药物作用靶标。然而，目前仍有100多种被称为孤儿受体的G蛋白偶联受体，其结构和作用仍然不清楚，GPR137正是其中一种孤儿受体。GPR137位于人第11号染色体的R56区，在中枢神经系统内广泛表达。已经有文献报道GPR137基因参与体内一些肿瘤的形成过程，如肝癌、乳腺癌、前列腺癌等。但在脑胶质瘤中的作用国内外尚未有报道。本研究中，GPR137在多种脑胶质瘤细胞中高表达。敲减GPR137后，U251和A172细胞增殖、克隆形成受到显著抑制，而且细胞周期停滞在S期。说明GPR137在胶质瘤的增殖，克隆形成等方面发挥着重要的作用。然而相关的分子机制有待后续研究证实。综上所述，GPR137基因在体外对胶质瘤细胞的增殖、克隆形成具有重要影响。同时，为GPR137成为胶质瘤靶向治疗基因提供了理论依据。