过敏性猝死豚鼠IgE含量的死后变化规律及肥大细胞脱颗粒的观察

作     者：郭相杰 

作者单位：山西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：高彩荣

授予年度：2006年

学科分类：08[工学] 0838[工学-公安技术] 

主      题：过敏性猝死 IgE ELISA 免疫组化 肥大细胞 组合染色法 

摘      要：目的：研究过敏性猝死豚鼠死后在4℃冷藏条件下血清IgE含量随死后时间变化的规律，观察过敏性猝死豚鼠肺组织内IgE的免疫表达随死后时间变化的规律，同时用组合染色方法显示肥大细胞脱颗粒现象，并探讨其在法医学鉴定中的作用和意义，试图为过敏性猝死的法医学鉴定提供准确、客观的指标。 方法：豚鼠64只，雌雄不限，体重200g左右，随机分为实验组和对照组，对照组和实验组又分别分为死后0h组、死后12h组、死后24h组、死后48h组，每组8只豚鼠。实验组采用多人混合血清注射液致敏豚鼠，建立过敏性休克死亡的动物模型，取豚鼠血清及肺组织。(1)用酶联免疫吸附实验检测豚鼠血清IgE含量。(2)采用免疫组化ABC法对过敏性猝死豚鼠肺组织IgE进行免疫组化染色，用BI2000病理图像分析系统对组织切片进行分析。(3)应用俾士麦棕—碘绿—马汀黄(BB-IG-MY)组合染色法显示肥大细胞脱颗粒现象。(4)数据的处理，采用SPSS 11.5统计软件，两因素方差分析。 结果：(1)实验组豚鼠在被抗原再次攻击后20s左右出现活动减少，1min左右出现休克症状，2-5min死亡，死亡率100％。对照组豚鼠均未出现任何症状。(2)过敏性猝死豚鼠与对照组豚鼠血清IgE含量相比较，p0.001，有统计学意义，可认为过敏性猝死豚鼠血清IgE含量显著升高;过敏性猝死豚鼠死后0h组、死后12h组、死后24h组、死后48h组血清IgE含量相比较，p0.05，无统计学意义，尚不能认为过敏性猝死豚鼠死后在4℃冷藏条件下血清IgE含量在48小时内随时间延长有明显的变化。(3)免疫组化染色结果表明，过敏性猝死豚鼠肺小血管壁及血管周围均出现浅黄色或棕黄色颗粒，对照组豚鼠上述组织部位无浅黄色或棕黄色颗粒。过敏性猝死豚鼠死后0h组、死后12h组、死后24h组、死后48h组肺组织IgE平均分布密度相比较p0.05，说明过敏性猝死豚鼠在4℃冷藏条件下肺组织IgE含量在死后48h内无明显变化。(4)组合染色法结果表明，肥大细胞胞质颗粒呈棕色，细胞核成绿色，红细胞呈黄色。过敏性猝死豚鼠肥大细胞脱颗粒现象明显，而对照组豚鼠肥大细胞未见脱颗粒现象。 结论：过敏性猝死豚鼠血清IgE含量显著升高。过敏性猝死豚鼠死后在4℃下冷藏，48h内血清IgE含量和肺组织中IgE随死后时间延长无明显变化，因此应用酶联免疫吸附实验检测血清IgE含量，或对肺组织进行IgE免疫组化染色，可为过敏性猝死的法医学鉴定提供客观的诊断依据。过敏性猝死时，豚鼠肥大细胞有明显的脱颗粒现象。