拉坦前列素游离酸对人Tenon囊成纤维细胞增殖和CTGF表达的影响

作     者：陈红芮 

作者单位：华中科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：曹阳

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

主      题：拉坦前列素游离酸 人Tenon囊成纤维细胞 结缔组织生长因子 MAPK信号通路 

摘      要：目的：长期使用抗青光眼药物的患者行滤过手术后，滤过道瘢痕化的发生率可能高于无用药史的患者。前列腺素类药物是目前认为最安全、最有效的局部抗青光眼药物，临床上应用广泛。本实验研究拉坦前列素的活性成分拉坦前列素游离酸（latanoprost free acid，Lat-FA）对Tenon囊成纤维细胞（human Tenon fibroblastcells, HTFs）HTFs增殖和分泌结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）的影响，并对其调控机制进行初步研究。 方法：遵照赫尔辛基宣言，征得病人同意后手术取眼科无青光眼病史的白内障病人Tenon囊组织，原代培养Tenon囊成纤维细胞（HTFs），光学像差显微镜和吉姆萨（Giemsa）染色观察细胞形态。 1. CCK-8试剂盒检测不同时间不同浓度拉坦前列素游离酸（Lat-FA）作用于HTFs的OD值。 2.酶联免疫吸附试验（ELISA）检测Lat-FA对HTFs分泌CTGF的影响。 3.应用MAPK信号通路阻断剂条件下，采用ELISA检测Lat-FA对HTFs分泌CTGF的影响。 结果：1.不同浓度0ng/ml、0.5ng/ml、5ng/ml、50ng/ml、500ng/ml、5000ng/mlLat-FA作用于HTFs测得OD值分别为：0.334±0.011，0.336±0.010，0.338±0.009，0.359±0.011，0.389±0.018，0.424±0.021，与对照组相比0.5ng/ml、5ng/ml组P值分别为0.665、0.375，无统计学差异，其余三组统计学均有显著性差异（P0.05）;不同时间段24h、48h、72h Lat-FA作用于HTFs测得OD值分别为：0.349±0.030，0.361±0.032，0.379±0.039，24h与48小时间无统计学差异（P=0.088），72h组与其余两组比较均存在显著的统计学差异（P0.05）。 2. Lat-FA处理HTFs24h后ELISA检测不同组分泌CTGF：对照组为83.577±2.752ng/L，Lat-FA组为108.710±3.654ng/L;Lat-FA组与对照组相比，具有统计学差异（P0.05）。 3. Lat-FA处理HTFs前，使用SP600125、SB203580、UO126三种MAPK信号通路亚家族阻断剂，作用HTFs0.5小时，分为Lat-FA组、Lat-FA+SP600125组、Lat-FA+SB203580组和Lat-FA+UO126组ELISA，共四组。Lat-FA处理细胞24小时后ELISA测得CTGF分泌量分别为：108.710±3.654ng/L，75.199±3.040ng/L，84.507±4.239ng/L，99.091±6.359ng/L;使用不同MAPK信号通路特异性阻断剂的三组与Lat-FA组相比，均存在统计学差异（P0.05）。 结论： Lat-FA对HTFs具有一定的促增殖作用，且该作用可能与时间和浓度存在一定相关性;Lat-FA能上调HTFs分泌CTGF;Lat-FA可通过MAPK信号通路上调CTGF分泌。