肿瘤转移抑制基因KAI1在喉鳞癌中表达的研究

作     者：吴祖良 

作者单位：中国医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：吴正虎;郭星

授予年度：2003年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肿瘤转移抑制基因KAI1 喉肿瘤 原位杂交 

摘      要：前言 喉癌是头颈肿瘤中的高发病，约占头颈肿瘤的13.9％，据世界各地报道，近年来喉癌的发病率有明显增长的趋势，严重危协人类健康和生存质量，肿瘤的浸润和转移是导致喉癌患者治疗失败和死亡的重要原因，而肿瘤发生浸润和转移的机理目前尚未明了。KAI1基因是新近发现的与肿瘤转移抑制相关的基因，定位于人染色体的11P11.2，其cDNA片段为2.4Kb，编码一种有267个氨基酸的蛋白质，分子量为29.61KD，其表达有多种调控机制并已在前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、结肠癌等多种肿瘤中发现表达下调并与肿瘤侵袭和转移相关，然其与喉癌发生、发展的相关性研究国内外尚未见文献报道。本研究通过观察KAI1在喉鳞癌、喉部不典型增生、喉息肉和癌旁正常喉粘膜组织中的表达，借以初步探讨其肿瘤特异性及其与喉鳞癌发生、发展的相关性，并探寻喉癌早期诊断、临床分期及其侵袭、转移潜能评估的参考指标，为临床制定治疗方案提供分子生物学参考依据。 材料与方法 选用中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科2002年1月～2002年10月行手术治疗的原发性喉鳞癌标本84例，其中男性70例，女性14例，年龄37～80岁，平均62.8岁，按照1997年UICC头颈部恶性肿瘤分期标准进行临床分期，临床Ⅰ期19例(TNM19例)，临床Ⅱ期35例(TNM35例)，临床Ⅲ期16例(TNM11例，TN1M1例，TN1NM4例)，临床Ⅳ期14例(TNM6例，TNM2例，TNM3例，TNM3例);声门型42 例，声门上型34例，声门下型3例，跨声门型5例;按病理分级，高 分化癌 34例，中分化癌 32例，低分化癌 18例(随访资料暂缺人 另分别选喉部不典型增生病变组织标本27例，声带息肉和经病理 确诊的癌旁正常喉粘膜标本各10例。全部标本均由病理医师取 材，经4％多聚甲8F／*** PBS(含有 1／1000DEPC)固定，石蜡包 埋，切片厚sp，贴附于多聚赖氨酸处理的载玻片上备用。 用KAll探针采用原位杂交方法检测喉鳞癌、喉不典型增生。 声带息肉及癌旁正常喉粘膜组织中KAll的表达。DAB显色。不 加探针为空白对照。结果判断：以胞浆出现定位清晰的棕黄色颗 粒状物为阳性。计算机图像分析：采用 Metamorph mager System V4．6彩色多媒体图像分析系统，对每张切片的原位杂交染色结果 进行定量分析，每张切片均选取不相重叠的五个代表性部位，在 40倍物镜采集图像并测量组织阳性细胞的积分吸光度值，取其均 值为该标本测量结果。统计学分析：应用SPSS统计软件处理数 据，组间表达程度比较采用 t检验，P0．05有统计学意义。 结 果 ***在喉鳞癌、喉不典型增生。声带息肉及癌旁正常喉粘 膜四种组织中有不同强度的阳性表达，其阳性染色为上皮细胞胞 浆中出现棕黄色颗粒状物。 ***在癌旁正常喉粘膜和声带息肉组织中有较强的阳性 表达，其积分吸光度k值)(5。S)分别为136206．8土36盯5．536 和1353M．53。纠113．＊8，两者差异无显著性(t＝O．阶8，P 0．05XKAll在喉不典型增生和喉鳞癌组织中表达较弱或仅有少 量散在阳性表达，其积分吸光度M值八k t S)分别为 93266．63 。15139．935和6788o．6M。2幻89．534，与癌旁正常喉粘膜及声 带息肉组捻异有显著性汐o．01人 ·2· ***在84例喉鳞癌组织中的阳性表达强度与肿瘤组织病 理分级、临床分期及颈部淋巴结转移呈负相关u0．01入与患者 性别之差异无显著性。 结 论 1．正常喉粘膜有较强的KAll阳性表达，表明喉可能是KAll 表达的组织特异性器官之一，提示KAll作为肿瘤转移抑制基因 其功能失活或降低可能与喉鳞癌的发生、发展相关。 2．喉不典型增生组织和喉鳞癌组织中KAll表达下调，且其 在不典型增生组织中的表达已明显下调，因而推测KAll表达下 调可能是喉鳞癌发生、发展中的早期件。 ***在原发性喉鳞癌组织中表达普遍下调，因而推测 KAll的下调不仅是喉鳞癌发生、发展中的早期事件，而且是普遍 事件。 4．喉鳞癌KAll的阳性表达强度与病理分级J分期、淋巴结 转移及临床分期呈负相关。研究结果初步表明，KAll基因低表达 可能是肿瘤发生、发展和颈淋巴结转移的相关因素，可望作为喉鳞 癌敏感而可靠的分子标记之一，为临床早期诊断和评估喉鳞癌的 侵袭转移潜能及发展阶段进而指导治疗方案提供分子生物